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问
蛋白加his单标签纯化不干净,优先考虑什么标签
bamboopiggy
你改一下洗脱液的ph试试,一般his-tag还是很好使的。
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问
蛋白大小为40k左右,应该选择什么标签
天一湖医者
蛋白纯化首选His-Tag,Western blot首选Flag-Tag,免疫共沉淀可选择Flag-Tag或其他常用标签如HA、cMyc,活细胞成像则应该选择荧光蛋白等。
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问
细胞加药处理,需要给细胞饥饿处理吗?
bamboopiggy
细胞加药,不需要进行饥饿处理,除非你的药物和血清会发生反应。
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问
免疫细胞和肿瘤细胞共培养时,基本注意事项有哪些呢
申东熙老伯
要看你的共培养是直接共培养还是间接共培养,免疫细胞和肿瘤细胞一般是间接共培养,用小室将两种细胞分离开,让细胞因子传递。
2 回答
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问
为什么石蜡切片在染色过程中会出现脱片的现象
申东熙老伯
染色工程中出现脱片可能是之前做的过程有问题,用盐酸的时候记得不要在盐酸里等太久,不然会脱片。
3 回答
897 围观
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问
在体和离体记录信号的frequency和amplitude分别代表什么意义?
天一湖医者
频率(Frequency),振幅(Amplitude),
1 回答
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问
求教:lnc RNA干预载体的构建?
天一湖医者
1. 选择合适的载体,依据实验室现有的条件进行选择:plvx-puro,Amp,puro,其他慢病毒载体的原理相似,例如pLenti-puro等 2. 找到基因的CDS区,复制;对于LncRNA,则直接选择全部序列即可 3. 用primer5找到目的基因上没有and载体有的酶切位点 4. 确定酶切效率,在酶边是否需要加保护碱基以提高效率 5. Kozak序列(针对表达蛋白的载体,而对于L过表达载
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问
酒精性肝损伤 水飞蓟素
bamboopiggy
水飞蓟素在不同溶媒中的溶解量,以PEG-400为最高,依次为乙醇、丙二醇、甘油。
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问
MCAO模型为什么总是进不到满意的深度
天一湖医者
插线栓主要还是要有耐心,插颈外的时候要牵扯颈外。不过只要你从颈外进到颈总,然后把牵扯颈外的线换个方向,线栓就会进到颈内了。
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问
动物肝癌细胞H22稳转
bamboopiggy
是不是你的基因的问题,过表达会增加血管的通透性,而敲低,会降低血管通透性。
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问
粪菌移植测定菌量
balalaLy
文献中比较普遍的方法是涂培养板到第二天计算菌落数量
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问
共聚焦免疫荧光分析
balalaLy
一种是可以取多个视野计算荧光强度然后取平均值,一种方法是计算阳性染色的细胞数
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问
Western blot实验时背景高且不均匀怎么办?
天一湖医者
封闭物用量不足,提高封闭浓度,使用适当体积保证孵育时完全覆盖。转印膜封闭物使用不当,检测生物素标记的蛋白时,不可用脱脂奶封闭。封闭的时间不够,延长封闭时间,抗体非特异性结合减少,抗体的浓度和孵育时间抗体浓度过高或洗涤不彻底,降低抗体浓度,增加洗涤时间和次数化学显色底物过多减少显色底物用量
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487 围观
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问
在表面活性剂裂解及酶解法进行生物样品预处理实验中,为避免细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中降解生物大分子,需要注意什么?
天一湖医者
为避免细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中降解生物大分子,可以加入蛋白水解酶抑制剂。
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问
WB实验跑出来的目标条带信号很弱是怎么回事
青柠清心
提取蛋白质过程中,应在低温环境下进行,以抑制蛋白酶的水解作用(可加入适合的蛋白酶转移不完全或过转移,可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头;适当调整转膜的时间和电流抑制剂)。一抗孵育时间不足,建议4℃结合过夜,或者是由于二抗与一抗不匹配,选择针对一抗来源的种属的抗体。 洗膜过度,洗膜时间不宜过长,加入的去垢剂不宜过强或过多,建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-2
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问
玻片测试时容易起雾,有好的方法吗?
天一湖医者
把盖玻片泡进酸性液体中,或者可以将盖玻片按压在平面木头上来回摩擦。于是雾便轻易地被木头磨掉了。而且不用担心盖玻片是不是会被刮花,因为玻璃的硬度大于木头。
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问
使用狗狗静脉取血实验,找不到黑皮肤狗的静脉如何解决?
bamboopiggy
要么换狗,要么凭借解剖位置找到大概,然后凭手感取。
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问
小鼠太凶怎么办,C57每次抓都被咬,后面需要量瘤打药还要好多次
yanlai000
戴防咬手套🧤 ,即使咬了也没事;抓的时候把耳朵固定住
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问
miRNA可以跑凝胶电泳吗?
bamboopiggy
可以跑,但是要用page胶,琼脂糖无法检测到。
3 回答
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问
无法找到家兔的动脉怎么办?
bamboopiggy
你要找家兔的什么动脉?颈总还是耳朵上的动脉?
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