同一个细胞系提蛋白以后敷抗体显影显出背景很深，条带很杂……

一个是你的封闭时间太短了。二个是你的抗体浓度过高。三个是你的有非特异性条带了，抗体特异性不高

你是一个抗体还是多个抗体都这样？如果是一个抗体，可能是抗体的特异性差，如果多个抗体都这样的话，可能是你蛋白降解了。

个人经验觉得你TBST洗涤的时间太长了