请教下H9C2细胞培养相关问题

奋斗中的小咸鱼

2022-07-05

在用细胞造模肥大表型时，检测相关指标，qpcr的anp，bnp，myh7数值都很大这是为什么啊，来来回回反复检测很多次了，每次ct都在30以上，同期内参只有不到13，崩溃了，救救孩子，有没有检测过这样指标的求指教，有的文献说他们用的第五代，是不是跟传代次数太高有关系啊

2 个回答

Eason老歌迷

2022-07-07

有帮助

你要是ct值这么大，肯定有问题。可能是模板量低或基因表达丰度低，建议增加模板量观察Ct值能否成相应倍数减少。或者qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低，建议通过标准曲线确认扩增效率。或者扩增产物过长，建议用三步法程序扩增或优化引物，扩增产物长度最好不超过300bp。或者体系中可能存在抑制剂影响酶的活性，建议梯度稀释模板或重新制备纯度更高的模板。你可以和你的同期讨论讨论。