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Western blot实验有阳性条带,但条带信号弱的原因是什么?
whilt-shirt
抗体浓度过低或者特异性不强,建议增加抗体浓度和敷育时间试试
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问
移除小鼠回肠组织后,保存前需要如何处理?
天一湖医者
保存的目的是什么,如果用病理或组化,可以用固定液固定,或者先放液氮,然后再转入冰箱冷冻,不过长期保存也是有时时间的,不知道你想保存多久。
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问
小鼠合笼两个月还没有怀孕,怎么处理
whilt-shirt
可以换新的种鼠或者喂养鸡蛋生瓜子增加小鼠营养
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问
小鼠肾脏透明病变
whilt-shirt
有可能是肾水肿,建议做个病理切片看看
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问
请教小鼠小肠组织的处理及短暂保存?
天一湖医者
如果用病理或组化,可以用固定液固定,或者先放液氮,然后再转入冰箱冷冻,不过长期保存也是有时时间的。
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问
跑磷酸化的蛋白总是杂带很多,该如何避免
whilt-shirt
使用5%BSA封闭,减少一抗敷育时间
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问
请问,细胞ELISA中空白细胞本地比实验组OD还好是为什么,OD一般控制范围在多少合适呐?
Eason老歌迷
正常情况是样品OD值和空白孔OD值都比较低,样品OD值略低于空白孔OD值。一般od值控制在2左右
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问
如何消除颜色对蛋白浓度结果的影响?
天一湖医者
用三路甲烷或乙醚萃取试试。或者稀释样品后做,去色素,过柱就可以了
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问
组织样本Wb内参跑不出来
天一湖医者
可能是因为一抗浓度过低吧,可以试试用1:500的一抗浓度,二抗用的1:2000试试看
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问
常规35-200之间的蛋白,应该用0.45还是用0.2um的转膜纸(pvdf)呢
whilt-shirt
0.45um的就可以,如果是小于10kd的蛋白那就要0.22um的
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问
胶的浓度与已知目的蛋白分子量,怎么确定用什么浓度的胶呢。。我们目前买的是固定比例的啊
太阳阳了
10%最常用,如果你跑的蛋白差距特别特别大的话也可以用梯度胶
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问
转膜后,如何选择抗体,敷抗体的时间怎么把握?
Eason老歌迷
根据你跑的目的蛋白选择一抗,然后二抗的话就根据你选的一抗种属来选择,一抗是鼠的就选抗鼠,一抗是兔的就选抗兔。一抗一般都是4℃孵育过夜。然后二抗常温孵育1.5h,别孵育太久。你可以做几次预实验,调整一下孵育时间,看看什么时间最合适。
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问
BCA法蛋白定量后,内参条带仍然不齐,怎么办?
蜡笔小迟
组织定量本来靠测浓度就不准,建议:先测浓度,按浓度跑内参,然后按内参灰度调整上样量。
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问
加入碧云天5x上缓冲液变性后,上样会漂样怎么办?
笋干CAU
我之前电泳缓冲液忘了稀释直接用的5x 样品就漂起来了
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问
间充质干细胞与氧化损伤细胞共培养
balalaLy
这个得做预实验,两种方法都试一下,哪种有效挑哪个。
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问
怎么查询某个基因座能够编码多少个氨基酸,翻译多少个蛋白质呢?
天一湖医者
第一,上ncbi检测有没有同源序列。第二,构建载体,转入过量表达看效果。第三,据此推测出蛋白序列,人工合成看效果。
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问
microRNA minics转染失败
Eason老歌迷
最好先用一个荧光标记的阴性对照做一个转染条件的摸索。
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问
原代细胞的转染
Eason老歌迷
还挺好转染的。一般常用的方法都是电穿孔法,磷酸钙共沉淀法,腺病毒转导,脂质体转染等。
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问
酒精性肝损伤
whilt-shirt
一般选用6-8周,20-24g的成年雄性小鼠
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问
如何用七氟烷处理细胞?
bamboopiggy
你这个可能要用到七氟烷挥发罐,用特殊的chamber将细胞养在里面。
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