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问
求助:用ELISA检测细胞饥饿不同时间点酪蛋白的增加量怎么计算?增量如何变化?
Eason老歌迷
elisa检测最重要的是就是数据处理了。1. ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测,分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%。2. 样本的OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值。3. 建立标准曲线:在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线(X轴上为标准品浓度,Y轴为对应的OD值)。推荐使用origin软件。
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问
293t细胞裂解液的选择
Eason老歌迷
用sds配吗?150 mM NaCL+ 1% NP-40 (去垢剂) + 0.1% SDS (去垢剂)+2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)+2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)或1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)+1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)+1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)
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问
磁珠偶联抗体时发现抗体有析出,颗粒样,最后信号偏低怎么办
Eason老歌迷
注意反应体系浓度,说简单点就是反应体积大点,蛋白浓度不要太高,太高也容易出现沉淀,况可能和静电有关。
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问
请教各位大神,在细胞实验里,怎么确定肿瘤细胞表面的受体和和它的中和抗体发生反应,
Eason老歌迷
最近在看这方面的文章,抗药抗体中的中和抗体能够通过直接与药物作用结合位点结合,或者通过空间位阻的作用,使药物失去与其靶点结合的能力,从而封闭、中和药物的治疗活性。免疫原性检测、评价可以做到。
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问
WB转膜问题,哪里出了问题呢?
申东熙老伯
转膜之前膜有没有在甲醇里活化呢?Western转膜液最好放在冰箱,天气热。
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问
帮忙看一下这个细胞是怎么了,新复苏的细胞突然长出来这种乳白色凸起的点,这是咋了?
whilt-shirt
有可能是污染了,建议降培养箱重新灭菌后再试试
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问
求助大神
dxy_az52pahw
如果程序温度过高,反转录的酶应该就失活了,建议重新配体系重新跑。
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问
细胞培养,求问是不是黑胶虫污染
balalaLy
有污染的话细胞内外都会有黑点,如果只是细胞内有,就应该是细胞状态不好,消化过久或者老化
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问
各位大神 关于热激法转大肠杆菌的问题
Miracle星
建议换一批不要用放在-20的,要不不也白浪费时间?还不知道准确与否?
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问
糖尿病心肌病怎么造细胞模型?
Miracle星
糖尿病心肌病造细胞模型1.实验动物 Wistar大鼠,120~150g,雌雄不限。2.实验方法 高糖高脂饮食(10%猪油、20%蔗糖、2%胆固醇、1%胆酸钠、67%常规饲料)喂养4周,采静脉血进行空腹(禁食10~12小时,其间自由饮水)血糖(葡萄糖氧化酶法)、胰岛素水平测定,造成胰岛素抵抗后,于第5周开始每周行链脲佐菌素(STZ)腹腔注射[15mg/(kg·W)×4],空腹血糖≥16.7mmo
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问
ARK1B1条带有时能曝出来有时曝不出来怎么办?
inventbiotech
从结果来看,是转膜的问题,优化转膜条件,但是有没有是因为蛋白样品,ARK1B1蛋白在样本中丰度如何,丰度不高建议针对蛋白所在的亚细胞结构进行分离富集,增加上样量。
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问
为什么用His的抗体 杂出了GST的条带?
小镇少年在学习
可以考虑换个his的抗体,his抗体也是识别HHHHHH,如果你目的蛋白里面有两三个连续的,然后抗体特异性又不好,也是可以识别的。
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问
race实验中特异性引物如何设计?有没有什么判断标准?
Miracle星
引物设计 使用锁定引物(lock docking primer):在oligo(dT)引物的3′端引入两个简并的核苷酸MN(结构为5′-oligo(dT)16-30MN-3′,M=A/G/C;N=A/T/C/G)。使用锁定引物可使引物定位在poly(A)起始位点,消除了在合成第一条cDNA链时oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位结合所带来的影响。3′RACE以3′末端的poly(A)序列
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问
蛋白酶 k的单位换算
Eason老歌迷
你是不是理解错了。U是酶活单位,意思为在一般情况下,1分钟内转化1微摩尔底物所需的酶量为1U,即1 U=1 微摩/分钟,试剂包装上应该有相应质量,即该质量药品所具有的酶活。例如10 mg的蛋白酶标注为25000 U,就代表每毫克蛋白酶具有2500 U的酶活,即每毫克蛋白酶每分钟可以催化2500 微摩蛋白。
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问
wb呈现的结果电泳跑道很明显是为什么。
inventbiotech
样品上样前离心去除杂质,,上样量要控制一下,基本可以解决这个问题
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问
转录因子要不要提核蛋白?
Eason老歌迷
提蛋白得用核蛋白提取试剂盒。它入核了
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问
痰标本处理疑惑
Eason老歌迷
以下为定值的判断条件:一个合格的痰标本,应该满足白细胞大于25,上皮细胞小于10,得出的结果才有意义。
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问
BD流式软件与Flowjo
Eason老歌迷
是不是没设置好,我感觉好像是初始化了,没调试好
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问
巯乙醇酸钠培养基配置
Eason老歌迷
给你分享一下我们实验室的巯乙醇酸钠培养基配方:示蛋白胨 10.0g,牛肉浸粉 17.5g,葡萄糖 5.0g,氯化钠 5.0g,磷酸氢二钾 2.0g,硫乙醇酸钠 0.5g,亚甲蓝 0.002g,琼脂 0.5g,pH7.2±0.2(25℃) 。
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问
为什么我跑了几次lc3蛋白,显影总是白膜一张?
bamboopiggy
lc3大概在17kd左右,您最好用15%的胶来跑,转膜时间控制在400mA,1小时就可以。
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