为什么我的细胞提取液中没有检测到目的蛋白？

首先要考虑你的目标蛋白，他是在细胞的什么位置表达，是内源表达还是外源表达，丰度如何，外源表达要考虑他是否表达了。就是确认你的蛋白在你的样品里。再考虑蛋白提取的问题，目标蛋白没检测到，可能是蛋白提取时没提取到，这样就肯定检测不到了，你的目标蛋白如果是内源的，估计丰度不高，还可能不定位在胞质这些普通蛋白提取方法可以搞定的，可以考虑柱式法总蛋白提取。还有如果是丰度低，可以考虑针对目标蛋白所在亚细胞位置，进行亚细胞结构的分离富集，再行检测。内质网，高尔基，溶酶体，线粒体，内体，细胞核，细胞质膜都可以。

测提取的蛋白浓度，确保提取的量和上样量，提取时加入蛋白酶抑制剂。

根据分子量选择合适的胶浓度和转膜条件。

抗体浓度调整。

文献支持细胞提取液中有目的蛋白。

有可能是抗体原因，建议增加上样量或者一抗稀释浓度试试

原因有很多：

a) 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；

b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。