为什么WB蛋白的杂带很多？

从结果来看，封闭应该问题不大，条带这么多，抗体的特异性问题应该最大，这感觉就是抗体没纯化直接上了，导致蛋白从头到尾杂交了全部条带的感觉，猛一看这图还以为是总蛋白银染结果，从抗体角度找吧。

两个原因，可能是蛋白降解或者抗体浓度太高，特异性不强。解决办法是尽量冰上裂解，提出蛋白以后立刻煮蛋白使蛋白变性。另外可以适当调整抗体浓度，孵育时间，抗体不好的话需要更换抗体。

1）目的蛋白有多个修饰位点，本身可以呈现多条带，建议查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小

2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作

3）杂蛋白多，建议处理目的蛋白

4）抗体特异性不强，建议使用特异性强的抗体

5）抗体孵育时间过久，建议减少抗体孵育时间

6）二抗与抗原有交叉反应，建议选择合适的封闭物

7）二聚体或多聚体存在，建议增加蛋白质变性过程及强度

8）底物显色与曝光时间过长，建议缩短显色及曝光的时间

杂带太多，可能是你的抗体特异性太差。然后你的封闭时间也可以稍微延长。

你这个情况有可能是蛋白降解了，不是抗体和操作的原因