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实验问答

28,263,698 科研人在看

问养细胞为什么会出现这种碎片一样的东西（HCT116

Eason老歌迷

可能是你的传代时机选的不好，细胞老化成细胞碎片。可能是传代垂悬没混匀，细胞成团生长。

3 回答1406 围观

问跑了大半个月，IRF3只跑出过一次，这是抗体有问题吗？内参还算可以？

Eason老歌迷

没看出来有条带，你转完膜封闭可以用丽春红染色看一下有没有条带，或者你延长一下封闭时间，背景太脏。

3 回答433 围观

问菌落计数平板pca为什么会出现连片的菌落

你好几和户

那说明你涂平板时菌液浓度高了，要继续稀释。

3 回答1810 围观

问targetscan搜索后Pct是N/A是怎么回事?

你好几和户

数据没出或者没填全，出现不能获得数据的提示

4 回答633 围观

问番茄红素标品用什么流动相跑，用的c18反向柱

你好几和户

色谱过程中携带待测组分向前移动的物质称为流动相。与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一相。 1、可以用丙酮。2、有的反相流动相还用DMF和乙醚。3、主要是看丙酮对你的分析有没有影响流动相为水或缓冲液,比如样品的溶解,常加入甲醇、异丙醇、乙腈、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。

2 回答1212 围观

问有什么办法可以提高蛋白提取浓度？

默然前进前行

用水提取蛋白质时,还应考虑盐的浓度、PH、温度等因素。如:PH 溶液PH影响蛋白质的溶解度和稳定性,蛋白质提取溶液的PH应首先在保证蛋白质的稳定范围,选择偏离等电点两侧的某一点,以增大蛋白质的溶解度,提高提取率等。

5 回答436 围观

问关于PLKO.1测序

balalaLy

多挑几个菌落试试，我试过一个板反复测了几次，最后才测成功

3 回答1614 围观

问没有电转仪可以进行大肠的基因敲除吗？

冷泉港蛋白

1.首先我们讨论下，转化的原理：质粒是大分子，或者说很大，要想进入细胞，必须增加细胞通透性，细胞上面得有个大窟窿，进去之后还要立马恢复到正常状态2.除了电转，还有用化学转化的方法。你得制备感受态细胞，或者购买，再按照步骤进行。

3 回答458 围观

问脑室注射miRNA或siRNA微量注射器需要提前处理吗？

Eason老歌迷

需要提前处理!rna遇到rna酶直接就降解了。你可以先用外源RNA酶清除剂洗，然后在用无核酸酶水清洗，密封好，下次备用。

4 回答523 围观

问假病毒中和实验

冷泉港蛋白

重复分为技术上的重复和生物学意义上的重复，3个复孔是技术上的重复，就像QPcr实验要做3个复孔一样；生物学的重复是，同样的实验，不同的时间做3次。

2 回答519 围观

问脑冰切HE染色没有细胞形态，组织像海绵一样，求助

balalaLy

冰冻切片容易因为冰晶导致细胞破碎，组织形态会不好看，而且10ul有点太厚了，很难观察到单层的细胞。做HE、组化的建议用石蜡切片。

3 回答630 围观

问免疫共沉淀的图怎么看啊

冷泉港蛋白

一、免疫共沉淀的机理：1. 首先证细胞内存在这两个蛋白2. 阳性表明可能存在互作（实验组）3. 排除非特异吸附（对照组）：蛋白a b没有非特异吸附到磁珠和抗体的恒定区二、免疫共沉淀研究的几个层次1. 蛋白a和蛋白b是否存在互作（图上）2. 二者的关系，进行过表达（图下Flag）或抑制表达相关实验3. 是直接互作还是间接互作

3 回答1370 围观

问蛋白原核诱导表达与纯化

冷泉港蛋白

问题是蛋白挂柱不好。两个因素填料和蛋白1.填料是否有问题，把镍剥离，再挂一次2.蛋白his暴露的不好，his超级小，容易被卷进去：A.看下his是在N端还是C端，B.更换不同体系缓冲液C.可以考虑两段都加个hisD.如果实在不行，换成gst标签

4 回答1127 围观

问原核蛋白诱导表达

冷泉港蛋白

你的蛋白理论计算应该是20+46=66kd，1.上面的条带略高吧，也可以解释通。2.下面的条带应该是目的蛋白降解了，没有其他解释了，这个蛋白应该是超级不稳定。3.下面的条带如何证明是目的条带，抠胶打个质谱，花钱，也没有必要；纯化出来，37℃放置，第二天跑胶，估计就降解很多了4.如何解决这个降解问题，更换缓冲估计不行了，换载体吧

3 回答1982 围观

问求助：用了新的蛋白上样缓冲液后，SDS没有条带

冷泉港蛋白

需要知道上样缓冲液各组分及其浓度和特点，undefined上样含有4 %的sds，四度会结晶，需要恢复室温并混匀后使用。你加的上样缓冲液估计不含或含有很少的sds，不足以解离细胞或提供蛋白前进所需要的负电荷了。

4 回答483 围观

问求助｜flag-beads是自带抗性吗？

bamboopiggy

对，flag-beads是自带flag抗体的beads，你只要binding完了，煮了以后，要先用flag的一抗去杂，加二抗显影就可以。

3 回答2047 围观

问BrdU相关问题

冷泉港蛋白

1.BrdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物。能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中。因此BrdU与A通过非共价键结合。2.该实验必须解链，但目的是为了将与A结合的BrdU暴露出来，就像握手，松开之后才能与第三者握手。和抗体大小没有关系，是为了暴露出结合位点。

2 回答613 围观

问做了原核表达，跑了SDS-PAGE但是看不出来差异，所以做了个WB但是全是非特异条带，是怎么回事

冷泉港蛋白

第一张图在100kd位置，是有条带表达的，表达量不高，但有第3张图，28a载体的标签是his，his抗体的特异性很差，所以不要用his去做wb确定是上清还是包涵体后，摇个大样，过下柱子

4 回答684 围观

问阻断ELISA

yaonan120

1.是不是阻断剂效果不好呢2.这种情况可以说是灵敏度的问题吧，标记那边是否可以降低标记量。3.降低空白，稀释液中加点BSA可以降低空白。希望可以帮到你

3 回答8026 围观

问竞争ELISA和阻断ELISA的区别是什么呢？

天一湖医者

竞争ELISA和阻断ELISA免疫抗体检测方法都可对小反刍兽疫病毒免疫抗体进行检测，在同一块96孔酶标板中，竞争ELISA和阻断ELISA可以分别检测43份、93份和90份样品，但是竞争ELISA的操作相对比较复杂，且用时较多;阻断ELISA的操作简单，用时少。如果同时检测100份样品，竞争ELISA和阻断ELISA的准确率分别为85%、88%和95%，因此阻断ELISA的准确度和重复性均高于其竞

3 回答17374 围观

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