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问
什么样才叫三次独立重复实验啊?
bamboopiggy
同一个实验,在不同时间点,再做一次,或者是同一个实验,在相同的时间点,同时做,但是所用的试剂,细胞,动物,都是平行的,做三遍。
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问
筛选稳转细胞系用质粒还是慢病毒
府宅
1安全性高:由于慢病毒剔除毒性基因,目前实验未发现致病性,已被用于CAR-T治疗于人体;2 表达时间长:慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上,可实现目的基因长时间稳定的表达,不随着细胞分裂传代而丢失,是细胞实验的首选;3 免疫原性低: 直接注射活体组织不易造成免疫反应,适用于动物实验。
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问
自噬LC3不变,p62反而增加,有朋友遇到同样的情况吗
bamboopiggy
遇到过,我遇到过p62增加,lc3也增加的,这个可能是在自噬的不同阶段,LC3的改变和p62的改变也不是一直是一致的。
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问
B16 melanoma 复苏培养及冻存的方法
bamboopiggy
B16 很皮实,用DMEM高糖的培养基,加10%的血清,1%的双抗就可以。 冻存液用普通冻存液就可以。
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问
研磨细胞会导致蛋白质结构破坏吗?
冷泉港蛋白
研磨不会直接破坏蛋白结构。一、关于研磨步骤和裂解液1.研磨破坏的是细胞之间的黏连,将细胞分散开2.裂解液含有裂解和促融成份,裂解细胞,释放蛋白。二、了解下蛋白的结构和降解蛋白有一级结构,氨基酸共价键链接,酶和酸碱可水解;高级结构靠氢键 疏水作用 等作用维持,容易破坏,通常使用的是表面活性剂。三、了解下蛋白的大小枪头是毫米大小,细胞是微米级别,蛋白是纳米结构。1毫米=1000微米 1微米=100
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问
请问wb检测信号通路应该怎么敷
bamboopiggy
可以切膜,按照marker切就好,如果想striping,建议先孵磷酸化的,然后striping后,再孵total的
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问
培养液pH值为什么变化太快?
麻黄连翘赤小豆
接触空气太久了容易变化酸碱度,每次用完培养基记得盖,或者分装小瓶
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684 围观
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问
细胞复苏后细胞状态不好有哪些原因?怎么解决?
麻黄连翘赤小豆
原因很多,冻存液的好坏,冻存细胞的状态,冻存的温度,复苏太慢等等首先你要按照不同细胞不同冻存条件冻存,有些冻存液需要梯度冻存,有些血清冻存会比较好。冻存尽量选增殖较快的时候消化下来冻存,冻存后不能反复冻融
5 回答
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问
DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些?
麻黄连翘赤小豆
磁珠法,浓盐法,CTAB法,SDS法,实验步骤网上很多,具体还需要和你实验室条件进行匹配
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1253 围观
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问
无水硫酸钠柱的使用步骤,是一次性的吗
bamboopiggy
你如果可以重新填无水硫酸钠,就不是一次性的,但是如果只脱水 完了,没法重新填,拿就是一次性的
3 回答
1047 围观
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问
铁子们,这种情况是为啥啊啊?我之前有跑过这些引物没啥问题,现在真的好多问题
麻黄连翘赤小豆
有多峰,可能引物时间放久了,看右边还有好几个问题,样本或者加样都可能会有问题,再者你用的染料是否冻融多次也要考虑一下
3 回答
383 围观
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问
如何减少杂带的产生,求解。。。
bamboopiggy
WB?封闭充分,找个好的抗体,有的没办法,抗体不好,总会有杂带。
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问
琼脂糖凝胶电泳结果求助
bamboopiggy
你是用kit提完质粒才酶切的?还是直接用菌体,粗提一下就酶切的?感觉是质粒酶切产生的杂质。
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646 围观
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问
免疫荧光双染问题
Eason老歌迷
我觉得如果文献都说他在神经元内表达,那么你染色的结果就不太对,可能是染色的试剂问题。
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704 围观
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问
拿什么拯救你,我的snu182🤧🤧 2000+的血清养不活?
麻黄连翘赤小豆
看密度还可以,是否需要在培养基中加入某些生长因子刺激增殖或者改用其他好一点的血清,或者把血清浓度调高,不一定10%的血清就适合这类细胞
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527 围观
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问
求助p65免疫荧光入核的统计分析
是个幸运的小朋友
我是用的显微镜自带软件测定的,直接数核阳性的细胞
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问
ELISA检测细胞8-OHdG
此用户已注销
小心收集上清液,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
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问
原代IF:人结膜囊成纤维细胞
丁香一方
谢谢老师分享的图片及经验,这染的觉得没谁了
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问
小鼠采血血清需要抗凝管吗?
是个幸运的小朋友
如果要取血清做elisa的话就不要抗凝剂,取血后,迅速常温离心取上清就好
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问
请问向细胞培养基中添加不同浓度的必需氨基酸,若添加后呈紫色,怎么调节培养基PH?
精准检验每一天
这要看一下这些氨基酸的水解特性,还有可以用缓冲液调节pH值的,希望能帮到你!
2 回答
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