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        求助|flag-beads是自带抗性吗?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        了不起的面包片

        麻烦问一下做ip的时候flag-beads过夜,意思是能把带flag标签的蛋白拽下来是吧🤔 那相当于已经一抗敷过了吗?

        我把煮完的珠子跑完电泳直接用二抗敷会有条带吗?

        问题可能有点奇怪🙏但是我真的没找到该怎么做😢

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        3 个回答

        user-title

        冷泉港蛋白

        有帮助

        不能这样做。

        1.flag-beads是flag抗体通过共价键和磁珠交联的。

        2.捕获的蛋白和抗体之间是通过非共价键结合的,煮沸可以破坏非共价键和蛋白的高级结构,破坏不了共价键。

        3.因此煮沸解离后:A蛋白释放出来了 B.抗体与珠子仍旧交联在一起 C抗体没有活性了,结合不了蛋白了

        综上所述,做wb必须加一抗!

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        对的,是这样理解的,做ip的时候flag-beads过夜,相当于已经一抗敷过了,跑完电泳直接孵二抗即可

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        对,flag-beads是自带flag抗体的beads,你只要binding完了,煮了以后,要先用flag的一抗去杂,加二抗显影就可以。

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