实验问答

22,233,658 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问第一步孵育时间多了半小时怎么办？

whilt-shirt

可能后面背景比较深，多洗几遍试试

5 回答330 围观

问做Elisa时候用的是肝脏组织，因为肝脏富含蛋白，弄了很少一部分，但在检测吸光度时还是数值超标直接横线没测出来，怎么办

whilt-shirt

这种情况可以再稀释一下，降低浓度

3 回答176 围观

问免疫荧光所用的玻璃片可以使用紫外灭菌吗

你好几和户

如果是有标本玻璃片肯定是不可以的，会干扰，因为荧光抗体与标本中的抗原发生特异性结合，在荧光显微镜的蓝紫光或紫外光照射下，标本中的抗原抗体复合物便发出特异的荧光。

9 回答316 围观

问玉米籽粒GUS染色，为什么阴性对照也被染成蓝色？

Eason老歌迷

很常见，某些带有GUS但无驱动GUS启动子的空载体，如pCAMBIA系列的某些载体，可能会出现以上情形。这是由于驱动选择标记基因的35S启动子的增强子可在一定程度上远程地调节GUS的表达，这在CAMBIA网站上也有提醒说明。或者，材料被某些菌污染了，菌的类GUS基因表达了，可考虑使用含有植物内含子的GUS基因载体。

1 回答1020 围观

问动物失明怎样观察？

bamboopiggy

可以通过脑电，进行观察。或者是从小鼠能看的见的方向接近小鼠，看小鼠是否有闪避。

4 回答452 围观

问为什么注射完富血小板血浆后1天小鼠死亡了

bamboopiggy

解剖看一下，肝脏等各个内脏是否有损伤。

4 回答319 围观

问IHC求助｜小鼠4T1肿瘤组织染不出CD8

麻黄连翘赤小豆

如果染不出来可能还是抗原修复的问题或者封闭的问题，组织固定时间太短也可能导致抗原分解或者弥散

2 回答659 围观

问MCF7表不表达NKG2DL呀？

bamboopiggy

The NKG2DL expression levels of seven human BC cell lines (BCap37, MDA-MB-231, Hs 578T, MCF-7, SK-BR-3, MDA-MB-468 and BT-474) ，你直接看Silencing NKG2D ligand-targeting miRNAs enhances natural killer cell

2 回答303 围观

问细胞免疫荧光实验重复问题

bamboopiggy

1.最好单独染一个孔，然后再重复两次，因为你一次做三个，可能三个都是一个样子，要错就都错了。2，对，你说的对，三次取平均3，你用pfa固定细胞，感觉是要做胞内荧光，但是不建议你保存那么长时间，还是回来再继续做吧。

4 回答2274 围观

问求助:细胞免疫化学实验抗体的问题?

bamboopiggy

一般不用enhacer，加了这个容易出假阳性

3 回答255 围观

问求助关于免疫实验抗原的问题？

此用户已注销

由于组织在甲醛或多聚甲醛在固定中，发生蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而掩盖抗原决定簇。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定簇重新暴露，提高抗原检测率，常用方法通常使用高压加热修复，使用高压加热修复对修复温度和时间的把握十分重要，温度越高修复时间越短，温度与修复时间呈负相关。修复结束后注意室温冷却，让蛋白自然复性。另外，大家尽量使用过量的抗原修复液，防止高温液体挥发干涸，对切片造成不可逆影响。

3 回答373 围观

问在做荧光定量pcr三个平行时候，怎么做才能使三个平行的差异降低？

whilt-shirt

换用高精度的移液器，选择挂壁低的枪头

7 回答651 围观

问 RIP免疫互作怎么验证

Eason老歌迷

结合的RNA序列通过microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来鉴定。

1 回答495 围观

问免疫荧光计数统计时选取的技术视野内如果不理想，可以增大视野吗

bamboopiggy

统计视野的大小要一样，但是可以挪位置，换个视野。

4 回答253 围观

问细胞免疫荧光图定量统计

Eason老歌迷

细胞免疫荧光或组织切片进行免疫荧光后，一个组织拍摄3-5个视野。统计时用的软件是可以用imagej 也可以用ipp6。

2 回答1065 围观

问求流式检测胞内抗原时打孔液的配方？

你好几和户

加⼊10%Triton X 100，（破膜⽤）；加⼊1 mmol/L氯化钙，（问题所在），吹打均匀，孵育1~10min，测定荧光即Fmax值。

4 回答597 围观

问Co-ip实验中为什么重链轻链对结果有影响？

bamboopiggy

因为你用的抗体可能会识别重链轻链，如果位置又和重链轻链接近的话，阴性对照也会出现条带。

3 回答1010 围观

问流式分选仪补偿怎么调整

此用户已注销

现在流式细胞仪都是自动调节荧光补偿，不过也要做好准备工作。如当我们同时检测四种荧光素FITC、PE、Per CP、APC，做补偿调节，需要以下的样本，无任何染色的样本，FITC， PE， Per CP以及APC单染阳性的样本，这里需要一共5个管子。在纯手工的年代，你需要画出这四个颜色两两配对的散点图，比如FITC-PE， FITC-Per CP， FITC-APC， PE-Per CP，PE-

5 回答1481 围观

问请问多色免疫荧光这个技术如何？能够单独作为一篇文章的新技术亮点吗？

你好几和户

是亮点但也是难点，组织多色免疫荧光（mIHC），其染色分辨率更高，荧光信号强度更强、更稳定，并且不受抗体种属的限制，还是比较推荐的。

4 回答638 围观

问为什么nlrp3做出来有很多杂带？

你好几和户

膜可以切大点，还有转膜可能没转上，找下相关文献考虑调整下转膜条件。

4 回答196 围观

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