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问
磷酸化AKT WB实验复孔结果差异大
bamboopiggy
wb只要趋势一致就可以,不能要求量一定一样,因为跑胶,转膜,封抗体等,都会造成影响。
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问
多片段无缝克隆一直连不上怎么办?
bamboopiggy
画好组合成的质粒图,然后一个片段一个片段的对引物,一般这种情况就是引物出问题了。还有就是在连接的时候,你可以把短片段的多放一些。
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问
MRC-5细胞生长巨快,1:4传,一只需要一天,正常吗,如果需要降低传代速度,那么1:8或者更高的传代代数,细胞会不会迅速老化?
Eason老歌迷
长的快说明细胞状态好。我觉得你可以用1:6/1:8这种传代代数来试试 可以隔一天传一次。
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问
血清离心上层分层,但是吸取的会带有红色的血
bamboopiggy
3000rpm 5min就够了,或者1000rpm 10min,你说的上层有血,应该是红细胞破了。看你要做什么实验了,有的红细胞破了没影响,有的不行。
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问
脓毒症造模成功标准?
你好几和户
一感染因素最好以感染灶、创面感染或内源性感染的形式出现.以模拟人类感染引起---系列病理生理反应的自然过程;二发病过程中血细菌培养及内毒素检测为阳性;三MODS发生距原发打击有一定的时间;四有明显的脓毒症表现,呈现高动力循环状态和持续高代谢反应;五有足够的死亡率和MODS发病率。
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问
石蜡切片的制备过程中昆虫组织切不下来?
你好几和户
自己感觉可以检查下切片机的零件是否旋紧,切片是用力要适当,不可过猛,而且现在是夏季,石蜡容易软化,可用冰块冷却。
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问
各位大侠求助,最近在做RT-LAMP实验,采用荧光的方法,但是阳性和空白都有荧光曲线,只是空白起峰晚一些,这是污染还是引物的问题
Eason老歌迷
如果阳性和空白都有荧光曲线,但是空白起峰晚一些,我感觉是引物的问题。
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问
求助:免疫荧光实验出现结晶的物质?
bamboopiggy
检查一下你的盖玻片有没有特别脏,还有就是你拿什么封的片?
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问
关于大鼠软骨细胞的II型胶原免疫组织化学染色问题?
此用户已注销
免疫荧光染色出不来,有可能是一抗的问题。
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问
做wb,pcr 实验,解剖后新鲜组织可以先放-20度再转移到-80度吗?
bamboopiggy
最好直接放-80,速冻,否则组织容易降解。
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问
请问跑wb,pcr 需要多少组织量呢?
bamboopiggy
wb你最好测个蛋白浓度,20-40ug的上样量就可以,pcr,只要够提dna的就可以,大概绿豆到黄豆大小吧
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问
变性蛋白和非变性蛋白,哪个保存的更久
bamboopiggy
最好是变性,非变性的更容易降解。
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问
糖尿病实验中Y-氨基丁酸是第一个既能刺激细胞增生,还能避免细胞被免疫破坏的介质吗?
Eason老歌迷
是的。实验通过给小鼠注射了γ-氨基丁酸的物质,结果显示它可以让已经患上糖尿病的小白鼠的病情得到逆转,甚至达到临床治愈。实验还表明这种γ-氨基丁酸物质可以有效的预防糖尿病发生。国际最权威的糖尿病研究机构之一、发明胰岛素的实验室、多伦多大学班廷贝斯特糖尿病研究中心主席高度评价这项成果,他认为:“γ-氨基丁酸是第一个既能刺激β细胞增生,又能避免β细胞被免疫破坏的介质。”
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问
elisa实验可以用超纯水可替代双蒸水吗?
bamboopiggy
你说的超纯水是miliQ水么?是可以的。只要不含杂质和盐就可以。
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问
做PCR时只加一种引物,琼脂糖凝胶电泳可以跑出来条带吗
huang282815
加一种引物一般是没有条带的,一般是加一对引物
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问
10%的预制胶,这条带是不是典型的哑铃型?求解决?后面反白跟封闭有关系吗?
bamboopiggy
用预制胶,要把梳子齿里的甘油冲干净,否则会影响上样的样子。反白,可能是你抗体浓度太大,或蛋白浓度太高,导致辣根过氧化酶反应太强,出现的烧心现象。
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问
请教 这四张图中分别都是些什么东西?第一张应该是污染了。后面的呢,谢谢
Eason老歌迷
后面三张分别是真菌污染,支原体污染,黑胶虫污染,
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问
在做免疫荧光实验时,怎么消除背景荧光?
风闲少年
尽可能冰冻切片吧,然后每次清洗都要有三次,做好阴性对照,只加二抗那一组。
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问
TGF-β1造内皮间质转化模型
风闲少年
目前HUVEC培养使用EGM2培养基,里面的血清可以先不加血清,使用kit中的其他因子。
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问
IP实验
转云511
说明你的目的蛋白在野生型的细胞里也有表达,但是表达量很低。过表达的细胞里,目的蛋白表达量多。IP后,可以看到很明显的,过表达的蛋白条带要比野生型的条带粗的多。野生型在这里可作为对照,一个目地是看你的方法对不对,方法对的话,野生型是有条带的,要是没条带,说明IP的步骤有问题;另外一个目地是看,你的过表达细胞是不是目的蛋白真的过表达了,从条带的粗细可以看出来。
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