求助WB内参不齐，如何解决？
自律HBWS
六孔板种胶质瘤细胞，每孔加150ulripa，刮20分钟，用BCA测蛋白浓度，标准曲线r值大于0.99。
内参用过actin和GAPDH。但就是内参还是不齐，目的条带都有。用image J分析，灰度值差两倍。如何解决，请教有没有解决办法。
4 个回答
Eason老歌迷
有帮助
如果内参没有选择错误,而只是内参不齐的话,那说明你的蛋白定量有问题,只需要根据内参的IOD做一下上样量的调整就可以了。
府宅
有帮助
做过多次WB还是不行，建议新鲜制备蛋白样品。
dxy_gwrp7ndq
有帮助
内参跑不齐。一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。
whilt-shirt
有帮助
先用image j做灰度分析，然后根据灰度值调整上样量，缺的部分用2x loding buffer补足
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