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        qpcr测蛋白Tm值

        相关实验:间接原位 PCR(原位杂交PCR)

        user-title

        dxy_kfnpr5w

        用荧光定量PCR做蛋白熔解曲线程序是怎么设定的,我做出来的结果总是向下的抛物线,我的程序是25℃2min,之后就开始收集荧光从25℃到95℃,每次增长1℃,每次停留时间为1min,然后结束收集荧光,再95℃2min.我用的是赛默飞的PikoReal荧光定量PCR。并且我用的染料为蛋白的oranger染料,qpcr里面选择的ROX光源几乎收集不到荧光,请问这个应该怎么去做。

        wx-share
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        4 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        测蛋白Tm值?学习了。加样有没问题,程序因该和普通qpcr一样是相对固定的吧,另外这个机器需要用ROX矫正么,应该一一排除。

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        whilt-shirt

        有帮助

        溶解曲线的程序一般机器默认,其他程序一般是根据试剂说明书设置

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        bamboopiggy

        有帮助

        按照你用的supermix的说明书,来设置melt cuve的程序,然后看你用的染料,你的机器上有激发的通道没有,如果没有,就要换染料。但是一般都是会有的。

        user-title

        你好几和户

        有帮助

        Tm值的计算方法:引物为20 mer以下时: Tm = 2℃×(A+T) + 4℃×(G+C) 引物为20 mer以上时:Tm = 81.5 + 0.41×(GC%) - 600/L 其中L为引物的长度。 在PCR反应过程中选择Annealing温度时,一般为 (Tm - 5)℃。

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