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实验问答

25,226,264 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问请问wb实验要用到的脱脂奶粉有性价比比较高的牌子推荐吗？

断爱天堂

普通伊利蒙牛的袋装奶粉，一条一条的那种就可以

2 回答570 围观

问兔多抗用溴化氢琼脂糖凝胶纯化没有成功是什么原因？一般怎么验证抗原偶联上了？

百泰派克-李工

使用溴化氢琼脂糖凝胶纯化兔多抗失败可能有多方面的原因，比如：1.凝胶本身的问题：凝胶的特性可能不适合所用的抗原或抗体，不同的凝胶有不同的孔隙大小和亲和力特性，确保使用的琼脂糖凝胶适合于你的实验。2.偶联效率低合：如果抗原和载体（如琼脂糖珠）的偶联效率不高，可能导致目标抗体的亲和力不足。3.洗脱条件：洗脱条件（如pH、盐浓度）可能不适宜，导致抗体不能有效从凝胶中洗脱出来。调整洗脱液的pH值或盐浓度可

1 回答220 围观

问请问，WB电泳的时候，蛋白的上样量为什么是20ug-30ug，蛋白量过多过少会怎么样？蛋白上样量是与WB的测定目的有关吗？

百泰派克-李工

Western Blot（WB）实验中，蛋白的上样量通常建议在20μg-30μg之间，因为这个量级通常能保证足够的蛋白量以获得清晰的条带，同时又不至于过多导致信号饱和或条带模糊。如果蛋白量过多，可能导致信号过强、条带模糊，甚至可能出现条带堆积的现象；如果蛋白量过少，则可能导致信号弱，难以检测到目标蛋白。此外，蛋白上样量也与WB的具体测定目的有关。例如，当研究低丰度蛋白或进行定量分析时，可能需要调整

9 回答13173 围观

问转膜过程前，为什么需要用转膜缓冲液浸泡膜啊？

百泰派克-李工

在转膜过程中使用转膜缓冲液浸泡膜是出于几个关键原因：1.膜的活化：某些膜材料，如硝酸纤维素或聚偏氟乙烯（PVDF），需要通过缓冲液活化以提高其亲和力，确保蛋白质有效地从凝胶转移到膜上。2.防止干燥：保持膜的湿润状态防止在转膜过程中干燥，干燥的膜可能导致蛋白质转移不均匀或效率降低。3.维持pH和离子强度：缓冲液有助于维持适宜的pH和离子强度，这对于蛋白质的稳定性和转移效率非常重要。4.减少背景噪音：

5 回答607 围观

问有没有大佬知道WB出现这种过曝光的条带是为什么啊？有什么解决办法吗？

静心观照

原因：中心部位高浓度HRP把底物消耗过快，中间部位底物消耗结束之后就不发光了解决办法：降低蛋白量，降低一抗和二抗的浓度。补救措施：可以调整一下曝光时间，在底物消耗完之前完成显影。最好还是从降低蛋白量，降低一抗二抗浓度入手。

5 回答4871 围观

问WB电泳样品孔中加样量一般是多少，这是根据什么来设定的，过多或过少又会导致什么后果诶

百泰派克-李工

免疫印迹(Western Blot, WB)电泳中样品孔加样量的确定取决于几个因素，主要包括凝胶的尺寸、孔的容积、样品的浓度和所需检测的蛋白质的丰度。通常，加样量范围在10到30微升之间。如果加样量过多，可能会导致以下后果：1.样品溢出：样品可能会从一个孔溢出到相邻的孔，导致结果混淆。2.条带模糊：蛋白过载可能导致条带模糊不清，难以区分。3.影响分离效果：过多的样品可能会干扰蛋白的有效分离。如果加

4 回答6401 围观

问各位老师，我目前已经用His标签纯化了目的蛋白A。做Co:Ip时，可不可以用myc标签纯化另一个蛋白，然后做co,ip实验？

百泰派克-李工

可以的。使用His标签纯化目的蛋白A之后，您完全可以使用Myc标签来纯化另一个蛋白，然后进行共免疫沉淀（Co-IP）实验。这种方法允许您特异性地识别和纯化两种不同的蛋白，从而使得Co-IP实验更加精确和可靠。在实验中，您可以用抗Myc抗体捕获Myc标签蛋白，然后检测是否有His标签的蛋白A与之相互作用。这种双重标签的方法增加了实验的特异性，有助于更准确地确定蛋白之间的相互作用。

4 回答617 围观

问蛋白组学检测到的差异蛋白为什么western blot检测不到？

百泰派克-李工

蛋白组学通过质谱等技术检测到的差异蛋白在Western Blot中检测不到可能有几个原因：1.检测灵敏度不同：质谱等蛋白组学方法通常比Western Blot更敏感，能检测到低丰度的蛋白。2.靶蛋白特异性：Western Blot依赖特异性抗体识别目标蛋白，如果抗体对该蛋白的识别性不好或者抗体质量问题，可能导致检测不到。3.蛋白修饰和变体：某些蛋白在体内可能经过翻译后修饰或存在不同的剪接变体，这些

6 回答837 围观

问WB的泳道背景比较黑，接近灰色是为什么啊？

百泰派克-李工

Western blot泳道背景变黑或接近灰色通常是由于以下几个原因造成的：1.过度曝光：如果曝光时间太长，胶片或成像系统可能会捕捉到过多的信号，导致背景变暗。2.膜处理不当：在转移或阻断步骤中，如果膜处理不当，比如阻断不充分，可能会导致非特异性结合，使背景变暗。3.抗体浓度过高：主抗体或次抗体浓度过高也会增加背景信号。4.洗涤不充分：如果洗涤步骤不充分，残留的抗体或检测试剂可能会增加背景。解决这

9 回答2818 围观

问小分子蛋白（10KD）WB实验电泳液中不加SDS，但是wb不就是依靠SDS聚丙烯凝胶电泳的吗？如果不加SDS，是用tris填平吗

百泰派克-李工

小分子蛋白（10KD）在进行Western Blot（WB）实验时，通常确实使用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。SDS是一种表面活性剂，它的作用是使蛋白质变性并赋予蛋白质负电荷，使蛋白质按照大小进行分离。如果你在电泳过程中不加SDS，蛋白质将不会完全变性，这意味着蛋白质的电泳迁移不仅受到它们大小的影响，还受到它们的形状和电荷的影响。这种情况下通常使用的是非变性电泳，或称为天然电泳。在

5 回答1394 围观

问wb目的条带连成一条，内参正常，可能原因

百泰派克-李工

如果您的 WB（Western Blot）目的条带连成一条，但内参正常，可能的原因包括：1.过度加载样本：如果您加载的目标蛋白质样本过多，它们的条带可能会连成一条，因此请确保加载适量的样本。2.抗体亲和力过强或浓度过高：使用的一抗或二抗过于亲和或浓度设置得过高，导致过度染色。3.过度迁移时间：迁移时间过长可能会导致条带的扩散和连成一条，因此请确保迁移时间适当。4.蛋白质浓度不均匀：如果样本中的目标

4 回答1551 围观

问Frontiers 在 Independent Review阶段有2个审稿人已完成，但是没有是否通过

_Bingo_

请问在IR阶段只有一个review is ongoing是指只有一个审稿人吗但是客服告诉我有两个审稿人

5 回答12355 围观

问细胞单克隆，有限稀释法铺完96孔板后，3-4天细胞就全部死亡，什么原因？

土井挞克树

检查一下培养时间，和培养环境。死亡大概率是环境问题。

6 回答1850 围观

问中国公共卫生管理杂志

土井挞克树

还可以，杂志含金量不错，难度不太大。可以投

5 回答277 围观

问爱思唯尔投稿Decision in process状态

514舍长

请问您最后怎么样？我也是这个，感觉大概率悲剧

4 回答3479 围观

问ros流式检测

yibufinn123

请问有双峰的Ros流式图，结果可用吗？放论文里可以嘛？这个现象挺常见的

3 回答1669 围观

问求助｜3T3-L1脂肪细胞换液频繁

口腔种植2yy

请问同学，你现在找到解决方案了吗？

5 回答886 围观

问Eye杂志审稿状态

josemia

亲，请问后续是什么结果啊，我也是under consideration 1个多月了

2 回答1199 围观

问PCR体系中的Mg2+有什么作用？

dxy_1lrncmke

Taq DNA聚合酶进行热激活。

5 回答14209 围观

问严格厌氧菌的生长曲线测定

Eason老歌迷

三个标样平行试验的相对偏差应小于0.25%如果平行样相差大，那么你就得重新再做平行实验。是不是你没有摇匀呢?或者就是你吸样的时候没有操作好。

4 回答2163 围观

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