实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问为什么每一个条带的边边都是这样的啊/有没有哪位大神遇到过？

dxy_9z1hjq54

什么东西啊，都没有看见图片，谁知道你说啥？

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问糖基化修饰在高温变性后会消失吗？

dxy_9z1hjq54

糖基化修饰是一种蛋白质翻译后修饰，它涉及在蛋白质分子上共价连接糖分子。高温变性会导致蛋白质的三维结构被破坏，使得原本紧密折叠的二级、三级和四级结构变得松散或完全伸展为无规则线团（变性态）。然而，糖基化本身是通过稳定的共价键（通常是糖苷键）将糖与蛋白质残基相连，这种化学键并不会因温度变化而立即断裂。

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问用sephadex g-100纯化蛋白柱子很堵，流速极其慢，请问怎么解决？

百泰派克-李工

使用Sephadex G-100纯化蛋白时，如果遇到柱子堵塞和流速极其慢的问题，可以尝试以下几种方法来解决：1.检查柱子的装填：确保Sephadex G-100介质在装填时均匀且没有空气泡。如果存在空气泡或装填不均，柱子的流动性会受到影响。2.调整样品的体积和浓度：如果样品的体积过大或者浓度过高，会导致柱子堵塞。尝试减少样品的加载量或者稀释样品。3.提高缓冲液的强度：有时候增加缓冲液的强度可以帮助

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问WB实验中，GAPDH正常，阳参也正常，就是样品组目的条带不出来是什么原因引起的，有没有大佬有过类似的问题

百泰派克-李工

如果出现以上情况可能有以下几种原因：1.目的蛋白的表达水平低：如果样品中目的蛋白的含量非常低，可能无法被检测到。这可能是由于样品的本质特性或样品处理过程中蛋白丢失引起的。2.抗体特异性问题：使用的一抗或二抗可能对目的蛋白的识别能力不足。确保抗体的特异性和活性。如果可能，尝试更换抗体。3.样品制备问题：样品在制备过程中可能发生了蛋白降解或损失。检查样品制备过程中是否有可能导致蛋白降解的步骤，如样品是

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问怎么验证两蛋白内源性相互作用啊

百泰派克-李工

验证两个蛋白之间的内源性相互作用可以通过多种生物化学和细胞生物学方法：1.免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）:这是一种常用的方法，通过使用针对一个蛋白质的特异性抗体来捕获该蛋白质及其可能的相互作用伙伴。如果另一个蛋白质也被沉淀下来，这表明两者之间可能存在相互作用。图12.亲和素纯化质谱（Affinity Purification-Mass Spectromet

1 回答546 围观

问sumo融合蛋白为什么在镍柱上柱上酶切切不掉标签？

百泰派克-李工

这种情况可能由几个因素引起：1.酶的活性不足：使用的酶可能活性不高，或者已经失活。酶的活性可以受到多种因素影响，包括储存条件、温度、pH值等。建议检查酶的质量和储存条件，或者尝试使用新鲜的酶。2.酶的浓度不足：可能酶的添加量不足，无法充分与蛋白接触或者达到足够的酶切效率。增加酶的浓度可能有助于改善切割效率。3.不适宜的酶切条件：酶的切割效率可能受到反应条件的影响，如pH值、盐浓度、温度等。需要优化

1 回答741 围观

问ip 实验求助！input组目的蛋白为双条带，ip组拉下来是单条带！

百泰派克-李工

在免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）实验中，如果在input（输入）组中观察到目标蛋白为双条带，而在IP组中只拉下单条带，可能是由于：1、蛋白修饰：在Input组中，目的蛋白可能存在不同的翻译后修饰形式（如磷酸化、糖基化等），导致电泳迁移速度不同，形成双条带。而在IP组中，可能只有一种形式的蛋白被特异性抗体识别并沉淀下来。2、蛋白降解：在Input组中，双条带可能是由于蛋白

1 回答387 围观

问如何根据图谱看蛋白大小

百泰派克-李工

在进行SDS-PAGE时，通常会在凝胶的一侧跑一个分子量标准（Molecular Weight Marker），这是一系列已知分子量的蛋白质。这些标准蛋白质在电泳后会形成一系列条带，每个条带对应一个特定的分子量。将样品和分子量标准一起进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后，观察样品在凝胶上的迁移位置，并与旁边的分子量标准比较。根据样品蛋白条带与分子量标准条带的相对位置，可以推断出样品蛋白的大致分子量

1 回答597 围观

问在高效液相实验中测样品时，用50%的甲醇溶解样品跟用100%的甲醇溶解样品时再上液相测量的话，测量结果有啥不一样嘛？

百泰派克-李工

在高效液相色谱（HPLC）实验中，使用不同浓度的溶剂（如50%的甲醇和100%的甲醇）溶解样品，可能会对测量结果产生以下影响：1、溶解性：不同浓度的甲醇可能会影响样品的溶解度。如果样品在50%的甲醇中溶解性不好，可能会导致样品部分沉淀，这样在高效液相色谱中就无法完全检测到所有的组分。2、峰形和分辨率：溶剂的浓度会影响色谱峰的形状和分辨率。使用不同浓度的甲醇可能会导致色谱峰变宽或变尖，峰形的改变可能

1 回答640 围观

问WB蛋白块，每个颜色都是两边深中间浅请问是啥原因？

百泰派克-李工

在Western Blot (WB) 分析中，如果出现蛋白带两边深中间浅的现象，最可能的原因是样品过载。当在凝胶槽中加载的蛋白质量超过了其分离能力时，蛋白质在电泳过程中可能无法均匀迁移，尤其是在凝胶的中心部位。这会导致蛋白在边缘处迁移得更快或更远，造成带的中间部分相对较浅。为了解决这个问题，可以尝试减少加载到凝胶中的蛋白量，确保蛋白浓度和体积适宜，以便获得更均匀的带。同时，也建议检查电泳和转膜步骤

1 回答910 围观

问磷酸化蛋白质组在过柱富集分析等步骤后，怎么确定蛋白的磷酸化位点的？

百泰派克-李工

质谱技术是确定蛋白磷酸化位点的重要工具，在磷酸化蛋白质过柱富集分析后，接下来的实验流程如下：1、蛋白质消化将富集的磷酸化蛋白质用特定的蛋白酶（如胰蛋白酶）消化成较小的肽段。2、磷酸化肽段富集使用特定的亲和层析技术（如IMAC或TiO2）来富集磷酸化的肽段。这些富集方法能够特异性地结合磷酸化肽段，从而使其从非磷酸化肽段中分离出来。3、质谱分析将富集得到的磷酸化肽段进行质谱分析，最常见的是使用液相色谱

1 回答399 围观

问sds凝胶电泳上样时样品向上浮是什么原因啊？buffer和电泳液的浓度是配套的嘛

百泰派克-李工

SDS-PAGE（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）中样品向上浮的现象通常是由于以下原因造成的：1、样品准备问题：如果样品中含有大量的油脂或是有机溶剂，这些物质的密度可能低于水，导致样品在凝胶中上浮。确保样品在加入上样缓冲液后充分混合和加热，以保证蛋白质充分变性并与SDS结合。2、上样技术问题：在上样时，如果针头没有插入到凝胶的上样孔中，或者上样速度过快，可能会导致样品漂出上样孔。应缓慢、小心地将样品注

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问page胶跑完蛋白染考马斯亮蓝，出现空染是什么情况呢，有时候能染出来，有时候空染。

百泰派克-李工

PAGE凝胶（聚丙烯酰胺凝胶电泳）在使用考马斯亮蓝染色后出现空染（也就是部分区域未染色或染色较浅）的情况可能由多种因素引起：1、蛋白质浓度过低：如果某些泳道中的蛋白质浓度太低，可能导致这些区域染色不明显或看不到条带。2、染色或脱色不均匀：如果在染色或脱色过程中，凝胶未能完全浸没在染色液或脱色液中，或者这些液体在凝胶中分布不均匀，也可能导致空染。3、蛋白质未完全转移到凝胶中：在上样过程中，如果蛋白质

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问HIF-1A蛋白纯化

百泰派克-李工

HIF-1α（缺氧诱导因子1α）是一种在缺氧条件下表达的转录因子，它在细胞适应缺氧环境中发挥重要作用。蛋白质纯化是一个复杂的过程，涉及多个步骤，确保获得高纯度和活性的蛋白。以下是一个基本的HIF-1α蛋白纯化步骤概述：1.细胞裂解：如果HIF-1α蛋白在细胞内表达，首先需要裂解细胞以释放蛋白。通常使用裂解缓冲液（含有非离子洗涤剂如Triton X-100或NP-40，以及蛋白酶抑制剂以防止蛋白降解

1 回答367 围观

问wb实验时蛋白加热变性后有沉淀

百泰派克-李工

在Western Blot (WB) 实验中，蛋白质加热变性后出现沉淀是一个常见问题。通常由以下几个因素引起：1.蛋白质浓度过高：如果样品中的蛋白质浓度过高，加热时可能会导致蛋白质过度聚集和沉淀。2.样品缓冲液不适当：使用的样品缓冲液可能不适合所分析的蛋白质。例如，缓冲液的pH值或盐浓度不适当可能会影响蛋白质的溶解性。3.加热时间或温度不适宜：过高的温度或过长的加热时间可能会导致蛋白质结构受损，从

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问为什么有些蛋白在肿瘤组织中高表达却在血液中低表达或检测不到？

百泰派克-李工

蛋白质在肿瘤组织中高表达而在血液中低表达或检测不到的现象可能由多种因素引起：1.组织特异性表达：有些蛋白质可能在特定组织中高表达，如肿瘤组织，但在血液中的表达水平较低。这是由于蛋白质的生物学功能和表达调控机制决定的。2.血液稀释效应：即使肿瘤细胞产生大量的特定蛋白质，这些蛋白质释放到血液中后，由于血液体积庞大，可能被大幅稀释，从而难以检测。3.蛋白质降解：血液中的酶系统可能会迅速降解某些蛋白质，使

1 回答590 围观

问用一定浓度的乙醇回流提取样品时，过滤浓缩好是进行冻干再上液相测量好，还是旋转浓缩好直接上液相测量好？

百泰派克-李工

在使用一定浓度的乙醇进行样品提取后，接下来如何处理样品以进行液相色谱（HPLC）测量，通常取决于样品的性质和实验的具体要求。这里有两种常见的方法：冻干和旋转蒸发（旋转浓缩），每种都有其优势和局限性。一、冻干：1.优势：冻干可以非常有效地去除所有溶剂，特别适用于热敏感物质。这种方法不会导致热降解，适合对热不稳定化合物的处理。2.局限性：冻干过程较慢，需要更多的时间。对于一些不易重溶的样品，冻干可能导

1 回答373 围观

问过表达的带FLag标签的蛋白，可以用目标抗体检测到很强的带，但没法用标签抗体Ｗｂ检测到标签。原因是什么？

百泰派克-李工

在表达带有FLAG标签的蛋白时，如果可以用目标抗体检测到强烈的条带，但无法用标签抗体通过免疫印迹（Western Blot, WB）检测到标签，可能有几个原因：1.标签抗体的特异性或活性问题：可能是Flag标签抗体的特异性或活性不足。可能是抗体本身的问题，或者抗体已经过期或在储存过程中活性下降。2.标签位置的问题：Flag标签的位置可能影响抗体的识别。如果标签位于蛋白的内部或者被蛋白的其他部分遮挡

1 回答1659 围观

问蛋白在酶切之前就分成了相隔很近的两条带，在酶切后两条带分别减少，过akta后还是会出现相隔很近的两条带是什么原因，怎么解决？

百泰派克-李工

蛋白在酶切之前就分成两条相隔很近的带，并且在酶切和经过AKTA纯化后仍然出现这种现象可能有几个原因：1.蛋白异构体：可能存在蛋白的不同异构体或者蛋白质的不同翻译后修饰形式，如磷酸化、糖基化等。2.蛋白部分降解：蛋白可能在提取或处理过程中发生了部分降解，导致出现大小略有差异的多个片段。3.酶切不完全：如果两条带在酶切后分别减少，可能是酶切不完全导致的。酶切不完全可能是由于酶的活性不足、反应时间不够或

1 回答277 围观

问T2细胞结合力试验

大壮TCCZ

想知道不加的话做出来了吗，我的没有加一直都没有阳性结果，想知道是不是这个原因555

3 回答1444 围观

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