请问，WB电泳的时候，蛋白的上样量为什么是20ug-30ug，蛋白量过多过少会怎么样？蛋白上样量是与WB的测定目的有关吗？

Western Blot（WB）实验中，蛋白的上样量通常建议在20μg-30μg之间，因为这个量级通常能保证足够的蛋白量以获得清晰的条带，同时又不至于过多导致信号饱和或条带模糊。如果蛋白量过多，可能导致信号过强、条带模糊，甚至可能出现条带堆积的现象；如果蛋白量过少，则可能导致信号弱，难以检测到目标蛋白。

此外，蛋白上样量也与WB的具体测定目的有关。例如，当研究低丰度蛋白或进行定量分析时，可能需要调整蛋白的上样量以获得最佳结果。

一般情况下上样量在20ug到30ug之间条带不会太粗也不会太细，蛋白量过多过少都会导致条带结果不好看，影响最后的分析。上样量还是与测定蛋白有关系的。

wb上样量太多会导致蛋白条带无法分离，泳道内蛋白条带无法分离。相对表达量=总表达数量Ⅹ相对表达率，根据实际效果来看，一般来讲蛋白量控制在2~5微克Western-blot显印的效果比较好。

上样量太少可能显印不出来，上样量太大显印后可能面积太大颜色过深，对判断可能会有带来干扰。

wb电泳蛋白上样量太多会导致蛋白条带无法分离,泳道内蛋白条带无法分离。相对表达量=总表达数量Ⅹ相对表达率,根据实际效果来看,一般来讲蛋白量控制在2~5微克Western-blot显印的效果比较好。上样量太少可能显印不出来,上样量太大显印后可能面积太大颜色过深,对判断可能会有带来干扰。

低了会无信号，高了实验条带会连在一起或杂带多

一般的是20ug左右的总蛋白，但要根据你的目的蛋白在样品中的表达量再调整，如果目的蛋白表达很弱，那就得提高上样的总蛋白量，反之就得调低，不然容易最后显影的时候过曝

上样量的多少与目的蛋白的丰度有关系，由于组织相对于细胞来说杂质较多，上样量相对的要大些，一般可30～70ug，也有上到100多ug的

表达量高就少上一些，表达量低就多上一些。一般20-30就差不多，很低的要加到80左右，过多条带不好看还容易过曝。

过多的话背景会非常深，过少的话会不显影