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        WB的泳道背景比较黑,接近灰色是为什么啊?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_912bxwaq


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        9 个回答

        user-title

        百泰派克-李工

        有帮助

        Western blot泳道背景变黑或接近灰色通常是由于以下几个原因造成的:

        1.过度曝光:

        如果曝光时间太长,胶片或成像系统可能会捕捉到过多的信号,导致背景变暗。

        2.膜处理不当:

        在转移或阻断步骤中,如果膜处理不当,比如阻断不充分,可能会导致非特异性结合,使背景变暗。

        3.抗体浓度过高:

        主抗体或次抗体浓度过高也会增加背景信号。

        4.洗涤不充分:

        如果洗涤步骤不充分,残留的抗体或检测试剂可能会增加背景。

        解决这个问题通常需要优化实验条件,如调整曝光时间、改进膜处理步骤、调整抗体浓度和改善洗涤步骤。


        user-title

        sswei

        有帮助

        1.没有封闭好,但这个可能很小

        2.一抗浓度太高,

        3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长

        user-title

        周末也要努力呀

        有帮助

        蛋白没压好拖尾了,胶浓度低或者你封闭液没匀。

        user-title

        高山云初

        有帮助

        1.没有封闭好,但这个可能很小
        2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例,你最好先做个titration,确定一个最佳的抗体稀释比例
        3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长景值。

        user-title

        skyye

        有帮助

        这个有可能是封闭不够或者洗膜未洗干净导致的,可以适当延长封闭时间或提高封闭液浓度,洗膜时可在震荡摇床上清洗3次,每次5min

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        那就是一抗孵育过度时间太长导致的

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        可能有以下几个原因:

        1.没有封闭好,但这个可能很小

        2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例,你最好先做个titration,确定一个最佳的抗体稀释比例

        3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长

        user-title

        粥辰辰辰辰

        有帮助

        抗体过时或受损:过时或受损的抗体可能会导致高背景值。

        user-title

        feixue7758527w

        有帮助

        这个说明一抗太多或者冲洗不够的,也可能是清洗不够或者杂质太多的

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