百泰派克-李工
免疫印迹(Western Blot, WB)电泳中样品孔加样量的确定取决于几个因素,主要包括凝胶的尺寸、孔的容积、样品的浓度和所需检测的蛋白质的丰度。通常,加样量范围在10到30微升之间。
如果加样量过多,可能会导致以下后果:
1.样品溢出:
样品可能会从一个孔溢出到相邻的孔,导致结果混淆。
2.条带模糊:
蛋白过载可能导致条带模糊不清,难以区分。
3.影响分离效果:
过多的样品可能会干扰蛋白的有效分离。
如果加样量过少,可能导致的后果包括:
1.信号弱:
如果蛋白量过少,可能导致检测信号弱,难以观察到条带。
2.数据不可靠:
低丰度的蛋白可能无法被有效检测,导致数据不可靠。
因此,选择合适的加样量对于获得准确和可重复的WB结果至关重要。实验前需要根据具体实验设计和目标蛋白的性质进行适当的调整。
sswei
上样总体积一般不超过 15μl,加样孔的最大限度可加 20μ 样品,其实大一点的垂直电泳槽每孔最大上样量可以达到 40μl,胶做得很好的话 50μ 也是问题不大的
feixue7758527w
一般都是几微克,要根据具体情况。过多就会出现条带过深 ,背景过深,过少就会出现条带过浅甚至看不到的情况
高山云初
电泳加样量是随着你的加样槽的大小来定的,一般加样5-6ul已经足够了,还有的小样孔只能加2ul左右的。
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