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问
原代细胞实验中,培养液的PH值变化太快,可能是什么原因导致的?
loveliufudan
原代细胞的培养条件非常重要,其中培养液的pH值是一个重要的因素。如果培养液的pH值变化太快,可能有以下几种原因:细胞代谢产物的积累:细胞在培养基中生长繁殖时会产生代谢废物,这些代谢产物会改变培养基的pH值。如果培养基中细胞密度较高,代谢产物积累的速度就会更快,导致pH值的变化更加剧烈。培养液的缓冲能力不足:缓冲液是调节pH值的重要组成部分,如果培养液中缓冲能力不足,就会导致pH值的变化过快。气体平
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问
有大佬做过Protein Thermal Shift的Tm的实验吗,求解
土井挞克树
把曲线输出的纵坐标相应延长,避免曲线聚集
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问
细胞复苏培养过程中,多久可以生长增倍?
loveliufudan
对于常见的细胞系,如HEK293、NIH3T3等,通常需要1-3天左右才能看到明显的生长增殖。对于一些较为敏感或者容易死亡的细胞,如原代细胞、淋巴细胞等,可能需要更长的时间来进行适应和恢复。需要注意的是,在细胞复苏后,生长增殖的速度和质量可能会受到多种因素的影响,如培养基成分、pH值、温度、CO2浓度等。为了获得较好的生长增殖效果,建议在细胞复苏后逐渐适应新的培养环境,并对培养基进行调整和优化。
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问
细胞分瓶后第二天悬浮细胞多
此用户已注销
出现漂浮细胞有好几种可能第一是细胞死了,就漂起来了第二是在处理细胞的时候温度变化太大,建议预热培养液如果是用玻璃瓶培养的话改用塑料瓶试试可以半量换液
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问
细胞长着长着就污染了,拉丝,然后用支原体检测试剂盒检测为阴性,很莫名其妙
loveliufudan
针对您所描述的情况,细胞长时间培养后出现污染,但支原体检测试剂盒检测为阴性,有可能有以下几个原因:支原体检测试剂盒的灵敏度不够高,未能检测出污染的支原体。虽然支原体检测试剂盒的灵敏度较高,但是有些污染可能存在变异性,检测不出来。污染可能是其他类型的微生物,而不是支原体。细胞污染不仅仅局限于支原体,可能存在其他微生物的污染,例如细菌、真菌等。细胞污染可能已经过度,支原体已经被细胞吞噬或其他细胞已经被
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问
悬浮细胞培养前几天很好,冻存到液氮里,在复苏前两天也还好,之后就贴壁了为什么?
loveliufudan
悬浮细胞通常是在无血清培养基中培养的,这种培养基通常不包含血清中含有的黏附因子,因此这些细胞不会黏附在培养皿的底部。当您将这些细胞冻存并重新复苏时,有可能在复苏过程中或者在接种到新的培养皿中的过程中,细胞会受到一些创伤或者应力。这些应力可能会导致细胞产生一些黏附分子或者表达一些黏附因子,这些因子可以使得细胞黏附在培养皿的底部,从而形成贴壁细胞。此外,如果培养皿表面没有很好的预处理,比如没有涂覆一些
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问
cDNA跑PCR跑不出条带怎么办呀
橙汁儿青柠味
首先确定引物是否正确,其次调整pcr条件,如增加模板量,降低退火温度等等
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问
请问组织运输过程中如何保存?
橙汁儿青柠味
最好是用干冰运输和保存,如果不方便最起码也要用冰袋
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问
请问用于单细胞检测样本负80冰箱里能够保存多久?
橙汁儿青柠味
一般放一年内都还行,不过建议还是用新鲜样品
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问
各位大佬,有无创取微量组织的方法吗
sswei
玻片压诊法,皮肤胶带粘贴法等无创取微量皮肤组织。
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问
3T3-l1细胞,前天复苏,今天发现有一两皿里面长了很多密密麻麻黑色的杆状东西,镜下可看到在动,污染了吗?暂时其他的几皿没看到
橙汁儿青柠味
应该是杆菌污染了,建议处理掉别污染其他细胞
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问
请问脂肪细胞这种圆圆的状态是怎么回事呢?是污染了,还是死了呢?
橙汁儿青柠味
没有污染也没有死亡,就是细胞发生老化或者分化了
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问
WB条带比预测分子量大,公司建议去糖基化
橙汁儿青柠味
首先蛋白条带过大可能是存在修饰,但得确定是否是糖基化修饰,提完的蛋白按照它这个步骤操作是可以的
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问
组织里的蛋白ip不下来
橙汁儿青柠味
那有可能是蛋白量不够或在IP处理过程中样品丢失了
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问
跑WB时内参跑不出来?
橙汁儿青柠味
样品应该是浓度太低,导致测不到条带。首先分批次收货的样品可以暂存-80,等全部收获后一起做蛋白定量,然后加buffer煮沸之后再进行分装冻存于-80
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问
各位大佬 帮帮忙🥺 第一张是DNA的电泳图 第二张是PCR后的 为什么条带那么拖 而且第二张最后一个是水 为什么也P出来了呀?
橙汁儿青柠味
条带拖尾表明不纯存在杂志,水也能pcr出来,表明系统中存在污染,但如果分子量很小可能是引物二聚体
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问
跟别的实验室借的细胞,同样的培养基和条件,细胞形态不一样,为什么?
橙汁儿青柠味
可能细胞发生老化了,可以借一下代数比较靠前的细胞
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问
WB细胞蛋白取样后直接煮了放-20℃,隔几个星期后跑内参没有条带,加了蛋白酶抑制剂,还是降解了吗?
橙汁儿青柠味
应该是降解了,蛋白保存建议放-80,-20只适合短期保存
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问
乳腺癌干细胞和乳腺癌干性是一回事儿吗
dxyc42u
这不是一回事,后者只是代表有干细胞部分特性的细胞
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问
贴壁的哺乳动物细胞的转染实验完整做法
sswei
贴壁细胞的转染:在准备做细胞转染的前一天把细胞铺进细胞培养皿中,加入完全培养基培养24小时,使得细胞汇合度达到百分之六十到百分之八十。在转染前需要把完全培养基换成无双抗的完全培养基,以排除双抗对转染效率的影响。根据转染的细胞数不同选取适量的纯培养基分别稀释质粒和lipo3000,其中稀释完的质粒中加入p3000充分混匀后再加入稀释过的lipo3000中,把混合液轻柔的吹打混匀,室温孵育20分钟。孵
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