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组织里的蛋白ip不下来

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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spiriteda

组织里的蛋白,ip后考染没有目的条带怎么办,能看到55kd的抗体重链,也有非特异性条带,就是没有目的条带,但是wb有条带

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4 个回答

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橙汁儿青柠味

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那有可能是蛋白量不够或在IP处理过程中样品丢失了

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简简单单的8872

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考染蛋白检测限较wb高,在重链和轻链都存在的前提下可使用wb检测目的条带,若仍未检测到目的条带,可尝试增大ip体系。

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loveliufudan

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可能是由于以下原因:

IP反应条件不足:可能是IP实验中的反应条件不足,如抗体的用量过低、抗体与靶蛋白之间的亲和力不够强、结合反应时间过短等,导致IP反应不充分,从而没有完全沉淀目的蛋白。

免疫复合物洗涤条件不足:在IP实验的洗涤步骤中,必须充分清洗非特异性蛋白质和杂质,否则这些杂质会在WB实验中干扰目的蛋白的检测,影响结果的准确性。如果洗涤条件不足,那么非特异性蛋白质会和目的蛋白一起被卷入免疫复合物中,导致目的蛋白的条带被掩盖或消失。

WB实验条件更为敏感:WB实验相对于IP实验来说更为敏感,因为WB实验中用于检测的抗体可能比IP实验中使用的抗体更加灵敏或亲和力更强。因此,即使IP反应不充分,WB实验中也可能能够检测到目的蛋白的条带。

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balalaLy

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要么是没有磁珠没有结合成功,要么是抗体没有结合成功,抗体浓度需要优化。操作过程吹打、涡旋也会影响结合。还有使用的buffer也会有影响。

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