跑WB时内参跑不出来？

实验小白，实验室因为疫情断了，上面也没有师兄师姐带，全程自己摸索，现在跑内参（β-actin）的时候发现一板胶上面有些样本跑不出来（就是8个样本，2、3泳道很明显，有2个泳道完全没有，其他几个泳道很淡），而同一板胶上的目的蛋白都出来了，1抗和2抗都是新配的。样本都是同一批提的，用均浆器，RIPA裂解，加了PMSF，冰上操作，因为有DNA絮状物就用1ml注射器反复抽吸了10次，再离心（12000r，10min）取上清后分了三管（约100ul1管），马上放到-80里，然后等着这批样本都提完了之后再统一拿一管出来测浓度后分装成更小的管（按100ug的体积分装）。跑胶的时候就是一次拿一瓶这种小的再加RIPA和loading buffer 稀释到50ul，100℃煮5min，一次上样20ul。

所以各位老师们，我这是因为反复冻融了一次导致的β-actin降解了所以跑不出来吗？