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        cDNA跑PCR跑不出条带怎么办呀

        相关实验:长片段PCR实验

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        3 个回答

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        橙汁儿青柠味

        有帮助

        首先确定引物是否正确,其次调整pcr条件,如增加模板量,降低退火温度等等

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        loveliufudan

        有帮助

        如果在cDNA PCR实验中无法检测到预期的PCR产物条带,有几个可能的原因:

        DNA模板质量不佳:DNA模板质量对PCR反应结果有很大影响。如果DNA受到损伤或者降解,可能会导致PCR反应失效。建议使用高质量的DNA模板,如从高质量的RNA制备cDNA或使用纯化的基因片段作为模板。

        PCR反应条件不合适:PCR反应条件对PCR产物的生成也有很大影响。反应条件包括PCR引物的设计和浓度、反应体系的成分和浓度、PCR反应温度和时间等。如果反应条件不合适,可能会导致PCR反应失败。建议优化PCR反应条件,如调整引物浓度、优化反应体系和反应温度等。

        引物设计不合理:引物的设计也对PCR反应的结果有很大影响。如果引物序列不准确、长度不合适、Tm值偏高或偏低,可能会导致PCR反应失败。建议重新设计引物,确保其具有较高的特异性和灵敏度。

        PCR反应中有抑制物质:有时,PCR反应中存在的抑制物质(如盐、EDTA等)也可能导致PCR反应失败。建议优化反应条件,如尝试不同的反应体系,以去除可能存在的抑制物质。

        PCR产物检测方法问题:如果检测PCR产物的方法有问题,也可能导致无法检测到PCR产物条带。建议尝试使用其他检测方法,如聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管电泳、荧光定量PCR等。


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        土井挞克树

        有帮助

        可能是引物不合适或者酶冻融后变性,建议先检查引物,进行调整或更换,然后检查酶是否在使用范围

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