WB细胞蛋白取样后直接煮了放-20℃，隔几个星期后跑内参没有条带，加了蛋白酶抑制剂，还是降解了吗？

应该是降解了，蛋白保存建议放-80，-20只适合短期保存

可能是由于以下原因：

冷冻保存时间过长：即使加入了蛋白酶抑制剂，长时间的冷冻保存也可能导致蛋白质的降解，从而影响其在Western blot实验中的检测结果。

蛋白酶抑制剂不够充分：如果加入的蛋白酶抑制剂不够充分，可能会导致蛋白质仍然在冷冻保存期间发生降解，从而影响其检测结果。

如果一点条带没有的话可能是抗体放的不对，或者膜防反了都有可能，单纯的降解可能不会完全没有条带，而是会出现一些杂乱无章的小带，另外保存时间不要太长，时间太长也会降解

蛋白变性后放-20如果没有反复冻融是不会那么快降解的。煮蛋白的温度有没有达到90度以上，有没有加loading buffer，这些都会有影响。