悬浮细胞培养前几天很好，冻存到液氮里，在复苏前两天也还好，之后就贴壁了为什么？

悬浮细胞通常是在无血清培养基中培养的，这种培养基通常不包含血清中含有的黏附因子，因此这些细胞不会黏附在培养皿的底部。当您将这些细胞冻存并重新复苏时，有可能在复苏过程中或者在接种到新的培养皿中的过程中，细胞会受到一些创伤或者应力。这些应力可能会导致细胞产生一些黏附分子或者表达一些黏附因子，这些因子可以使得细胞黏附在培养皿的底部，从而形成贴壁细胞。此外，如果培养皿表面没有很好的预处理，比如没有涂覆一些黏附性的物质，也会导致悬浮细胞贴壁。

建议您在培养悬浮细胞时，应该使用预处理好的培养皿，并且尽量避免对细胞造成创伤和应力。另外，您可以使用抑制剂来抑制细胞黏附，比如加入一些明胶或者其他的黏附抑制剂。如果您在培养悬浮细胞时需要将它们冻存并重新复苏，您也可以在复苏的过程中加入一些黏附抑制剂，以减少细胞的黏附。

可能是没有及时更换和添加血清的原因，复苏后尽早更换和添加血清

看看有没有污染，污染了也会贴壁的