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求取小鼠鼻相关淋巴组织protocol,及将其制成单细胞悬液的操作步骤
AAATiamo1
求取小鼠鼻相关淋巴组织protocol,及将其制成单细胞悬液的操作步骤
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问
为什么要用PBS稀释血浆
往阳光f多处走
使用PBS(磷酸盐缓冲液)稀释血浆主要有以下原因:1. 维持稳定的pH和渗透压PBS的pH值接近生理pH(约7.4),能够为血浆中的生物分子提供稳定的环境,防止蛋白质等成分因pH变化而变性。PBS中含有一定浓度的氯化钠,能够维持与血浆相近的渗透压,避免细胞或生物分子因渗透压差异而发生膨胀或收缩。2. 提高检测灵敏度和准确性在检测血浆中某些成分(如纤维蛋白原)时,使用PBS稀释可以降低血浆的黏稠度,
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问
血浆被37度30分钟灭火后,核酸会发生什么反应?
生命科学从业者
是想问有没有降解吗?DNA不会,RNA会
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问
论文投稿时,是所有的结果都要进行三次生物学重复吗?还是重要的结果进行三次生物学重复?
做生物的翔仔
看期刊的具体要求。有些期刊不要求提交原始数据,有些要求提交做图的三次技术重复而不需要平行重复。有些则是需要三次平行重复的原始数据。
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问
求助 需要SD大鼠老龄鼠,请问哪里可以买到现货?
dxy_vkytze86
请问您是需要多大周龄的老年鼠呢?
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问
做铁死亡相关蛋白的验证,在wb收集细胞时需要把上清中的死细胞也收集上吗?
做生物的翔仔
需要,否则内参很难对齐,同时检测的相关指标很难有显著差异。
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问
跑了很多次,条带最后都是空白的怎么回事,但是内参又能正常显出来。
做生物的翔仔
BCL2也伤了我很多次,不过后来好歹是做出来了。我们的教训是一定选用PVDF,转膜时间可以短一点。这个蛋白在NC膜上不怎么结合。此外,抗体建议先富裕一下全膜。我们使用的是proteintech的还不错。
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问
WB实验中转膜时只有一块胶要怎么跑?
做生物的翔仔
另一个卡位空着就行,没有必要都加满。
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问
邻近连接分析可以取代wb吗?
做生物的翔仔
我们的经验是可以,你说的应该是可以取代Co-IP吧。我们有些内源蛋白不好抓的就是用Duolink进行补充。
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问
WB实验内参和目的蛋白要在一张膜上吗?这种情况是内参敷完抗体显完影再用剥离液洗掉内参抗体再敷目的抗体然后显影吗?
做生物的翔仔
最差要在一块胶上,转在一张膜后可以裁剪开分别富裕抗体。但是不要两块胶一块内参一块目的蛋白。如果条带距离很近建议洗膜重新孵育。
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问
纯小白,求助!!!请问我这wb结果为什么会这样?(蛋白分子量为50kda),该怎么改进?
做生物的翔仔
个人认为抗体问题比较大,建议更换抗体。
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问
最近这段时间新配的running buffer稍微放半小时就变浑浊,放到瓶里就像流沙的感觉一样,是因为SDS变质了吗?
做生物的翔仔
建议检测配置用的水的pH值,我们曾经出现过类似的问题。但是我记不太清楚是要求碱性还是酸性了,你可以自己探索一下。
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问
Coip琼脂糖珠法最后用2X上样缓冲液煮完蛋白以后,还需要再离心去掉beads,取上清吗,还是直接用有beads蛋白样跑WB呀
做生物的翔仔
去掉,否则在55/25左右会有杂蛋白出现。
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问
用lysis buffer提蛋白,加完loading之后变黄了,还有沉淀产生,煮沸之后变成了橙色,沉淀也变多了是为什么呀
做生物的翔仔
ph偏低,可以加入两到三微升碱溶液中和一下。
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问
CO-IP实验中Input组无条带,IgG组总是出现目的条带,请问如何解决
做生物的翔仔
需要确认目的条带是否出现在25和55附近,如果有的话推测可能是beads轻重链。排除方法是更换另一个种属的抗体,例如这次使用Flag R,可以选用Flag M的再次尝试。如果条带消失了表明确实是beads咋带。这样情况经常发生。当然也有可能是由于共沉淀是一个富集蛋白的过程,所以会适当的增加蛋白浓度。
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问
请问15KDa和42KDa蛋白转膜条件是多少?
做生物的翔仔
电流有点高了,150mA 1.5小时尝试一下。此外如果膜正面显影较浅,可以把膜反过来显影一次,如果反面比正面深,下次可以再继续减小电流。
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问
细胞接毒后,换液能加快细胞病变吗?
做生物的翔仔
上清中有释放的病毒,如果更换的话继发感染会降低,应该病变的会更慢。
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问
EB-BSA工作液配制
loveliufudan
在配制EB-BSA工作液时,通常会根据实验需求调整浓度。根据你的描述,原文中要求将2% EB溶液和60倍体积的4% BSA溶液混合,并最终稀释至0.67mg/mL。以下是可能的解释和操作方法: 1. EB溶液稀释:原文中提到的2% EB溶液是指EB(Ethidium Bromide)的初始浓度为20mg/mL的溶液。将这个初始浓度的EB溶液稀释60倍后,浓度将变为0.33mg/mL(20mg/mL
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问
T细胞WB蛋白浓度过低
Marvin777
您好,请问您解决这个问题了吗,我遇到一模一样的问题了
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问
wb检测,蛋白量检测下限多少呢?
趴趴不软
样品中目的蛋白的量,限于WB的检测下限问题,一般目的蛋白量最好别低于1ng(虽然ECL法下限是0.1ng,即100pg),最好在10ng以上为好。
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