WB检测膜蛋白无条带？

目标蛋白：FPN(膜蛋白) 62kDA

BV2细胞24孔板长满，收细胞3000r/5min离心去上清，

加入20ul 裂解液，BCA测浓度大概在8ug/ul，

加入等量2xloading后37°煮样60min，

8%浓度胶，上样量10ul，电压70V转120V，共用时大概120min。湿转260mA 120min，0.45PVDF膜，

5%脱脂牛奶封闭1h，PBST洗3遍，

一抗(Novus 1:1000)4°过夜，PBST洗3遍，

二抗1:5000室温1h，PBST洗3遍，

显影显示目标位置无条带。不知道问题出在哪里，是不是细胞量太少，或者抗体的问题，这个抗体是引用率最高的。请各位大佬救救！