求助！同源重组构建质粒连不上，求助各位大佬帮忙分析改进一下！！！

1、确定一下同源重组酶要求的最小同源重组碱基数是否符合要求

2、确定一下同源重组部位的退火温度是否高于同源重组时所需要的温度

3、确定酶切的载体片段大小是否正确，以及最好需要单独把载体片段回收（使用NEB重组酶时，此酶还具有连接酶功能）

4、确定目的片段大小是否正确

5、根据说明书要求的比例使用相应量的载体和目的片段

6、同源重组后尽量短时间内进行转化，避免同源重组产物反复冻融

7、检查抗性基因与平板的抗生素使用，以及平板的情况（是否制备的板子时间太长等）

8、如一楼所说更换感受态

换个感受态试试？我之前构10k以上的质粒用DH5α都没出来，换了stbl2就出来了。