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        [求助]电转化感受态细胞的制备

        相关实验:电转化流程

        user-title

        dxy_n3qmqbsr

        最近在做一株高粘性肺炎克雷伯菌的电转化,做了几次都没有成功,考虑第一个原因是这个菌有很厚的荚膜,电转化效率很低。第二个原因是感受态制备过程中的问题,听做过电转化的师姐说感受态制备过程中,用双蒸水和10%甘油洗菌离心后要把上清去除的非常干净,但是我用的这个菌粘性很大,12000rpm离心,菌体也不能很好地沉淀下来,吸去上清时绝大部分的菌也被吸走了,所以为了尽量保留多一点菌体,没有将上清完全除去,这样是否影响电转化的效率?有什么方法能够提高电转化效率吗?

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        5 个回答

        user-title

        dxy_2m9ohu3

        有帮助

        你好,请问你后面解决电转的问题了吗?

        user-title

        我不是Abby

        有帮助

        请问同学,这个问题您解决了吗?

        user-title

        vlinine

        有帮助

        离心之后先吸出上清,尽量吸干净一些,影响不算太大

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        我做过大肠杆菌和沙门氏菌,感受态制备的过程都是离心后直接用10%的甘油重悬再离心,离心也只是用5000-6000rpm,离心后也没有特意要把上清吸干净。

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        我之前做沙门菌也碰到过这个问题,就是离心的时候菌体很多都流失了。后面你可以这样,离心之后先吸出上清尽量吸干净,然后把上清再次离心,能保留好多细胞

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