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实验问答23,420,400 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

蛋白质

问为什么包病毒收的上清液很黄，但是离心完的上清液很红？

loveliufudan

黄色的上清液可能是由于胆固醇等脂质类物质或者其他代谢产物的积累导致的。如果在48h和72h收上清液时都出现了这种情况，可能与细胞类型和病毒载体有关。至于上清液离心后呈现红色，并且病毒沉淀很少，这可能是由于以下原因：剩余血清的影响：如果病毒载体中残留了较多的血清成分，在病毒沉淀时可能会与病毒一起沉淀下来，从而使上清液呈现出红色。此外，血清的蛋白质和其它成分可能会干扰病毒的沉淀和浓缩。病毒的沉淀能力：

2 回答769 围观

问Western Blot内参不齐有什么方法可以改善？

汤姆卜丽波

首先做好定量，按照标准曲线加内参，少的多加点，如果还是不齐，那就可能是内参不对，换一个内参

2 回答840 围观

问硫酸铵溶解度25度时饱和溶液为4.1M，即767克/升。分子量为132.12，怎么算的！求解？

loveliufudan

硫酸铵的分子量为 132.12 g/mol。饱和溶液的浓度为 4.1 M，即 4.1 mol/L。饱和溶液的密度为 767 g/L。根据浓度和分子量的关系，可以计算出每升溶液中硫酸铵的质量为：4.1 mol/L × 132.12 g/mol = 542.292 g/L因此，1 L 饱和溶液中硫酸铵的质量为 542.292 g。由于饱和溶液的密度为 767 g/L，因此 1 L 饱和溶液的体积为：1

1 回答2010 围观

问western blot跑出来的内参总是不齐，可能会是啥原因呢？

土井挞克树

可能是上样量不同不均匀，调整上样量再跑，还可能是分离胶浓度太高，可以调整分离胶浓度再跑

3 回答2077 围观

问WB结果不对也不知道原因。

loveliufudan

由于你提到同样的样品在立春红染色中也出现了类似的结果，只有一条泳道正常，那么很可能是样品中的蛋白质含量或质量的问题导致的。以下是一些可能的原因：蛋白质含量不足：如果样品中的蛋白质含量不足，那么Western blot检测时就可能出现很弱或无法检测到的条带。可以尝试增大加载样品的量，或者使用更敏感的检测方法。蛋白质质量不佳：如果样品中的蛋白质质量较差，那么就可能会导致不同泳道之间的信号强度差异很大。

3 回答678 围观

问给位大神，膜成了这个样子是怎么回事啊，感谢解答！

sswei

可能存在转膜电压过高，解决办法降低转膜电压。

3 回答374 围观

问目的蛋白是否外泌出细胞外的验证

汤姆卜丽波

如果你的目的蛋白太少了其实wb很难检测到，可以用elisa试试，你也可以把细胞沉淀也试试

3 回答482 围观

问WB检测GFP融合蛋白，条带大小不对

loveliufudan

可能是由于以下几个原因：目的蛋白融合GFP后的蛋白质折叠发生改变，导致抗体无法识别目的蛋白的特异性表达区域。这种情况下，建议尝试更换抗体，或者使用不同的抗体进行检测。目的蛋白融合GFP后的蛋白质含量较低，导致条带大小与GFP相似。这种情况下，可以尝试增大加载样品的量，或者使用更敏感的检测方法。目的蛋白融合GFP后的蛋白质降解或者聚集，导致条带大小发生改变。这种情况下，建议在提取过程中加入蛋白酶抑制

3 回答3032 围观

问WB条带比预测分子量大，公司建议去糖基化

橙汁儿青柠味

首先蛋白条带过大可能是存在修饰，但得确定是否是糖基化修饰，提完的蛋白按照它这个步骤操作是可以的

2 回答1196 围观

问组织里的蛋白ip不下来

橙汁儿青柠味

那有可能是蛋白量不够或在IP处理过程中样品丢失了

4 回答683 围观

问跑WB时内参跑不出来？

橙汁儿青柠味

样品应该是浓度太低，导致测不到条带。首先分批次收货的样品可以暂存-80，等全部收获后一起做蛋白定量，然后加buffer煮沸之后再进行分装冻存于-80

3 回答4079 围观

问WB细胞蛋白取样后直接煮了放-20℃，隔几个星期后跑内参没有条带，加了蛋白酶抑制剂，还是降解了吗？

橙汁儿青柠味

应该是降解了，蛋白保存建议放-80，-20只适合短期保存

4 回答1612 围观

问糖基化修饰

loveliufudan

一种常用的方法是使用Western Blotting对样本中的GICNAC进行检测。可以用特异性抗体对GICNAC进行识别，并通过Western Blotting技术来检测抗体与GICNAC的结合情况。如果阳性组中GICNAC的含量确实显著降低，那么在Western Blotting图谱上，相应的GICNAC带应该会出现减弱或消失的信号。另外，还可以考虑使用其他的生化方法来对样本中的GICNAC进

1 回答634 围观

问nos1 pkg

土井挞克树

NOS1和PKG蛋白的电泳相对比较好跑，注意胶浓度的配置和上样量合适及电压控制就比较容易成功

1 回答265 围观

问求助 🆘想请教一下作奶粉蛋白质电泳的方法

loveliufudan

下面是奶粉蛋白质电泳的方法：材料：奶粉样品蛋白质电泳缓冲液β-巯基乙醇10%聚丙烯酰胺凝胶特定的电泳设备（如盒式电泳仪、垂直电泳仪等）分子量标准品步骤：将奶粉样品加入适量的蛋白质电泳缓冲液中，并在室温下彻底混合。在样品中加入少量的β-巯基乙醇，以还原样品中的二硫键，使蛋白质成为单独的亚基。将样品煮沸（通常需要5-10分钟），以进一步破坏二硫键并使蛋白质变性。准备聚丙烯酰胺凝胶。将凝胶混合物注入电泳

1 回答284 围观

问尿素处理包涵体蛋白

loveliufudan

对于包涵体中的蛋白质，通常需要用尿素进行处理以帮助其在电泳过程中展开成线性构象，从而更容易被分离和检测。下面是一般的尿素处理协议，供参考：材料：包涵体样品蛋白质电泳缓冲液（含有适量的尿素）1 M Tris-HCl pH 8.01 M DTT1 M IAA（碘乙酸）蒸馏水步骤：在室温下取出包涵体样品，加入足量的蛋白质电泳缓冲液，并混合均匀。将样品加入1 M DTT（终浓度一般为10 mM），使其还原

3 回答2043 围观

问【WB求助】蛋白跑到一半下不来

loveliufudan

可能存在以下几个问题及对应的解决办法：1.蛋白质条带卡在某一个水平，无法继续迁移：这可能是由于电泳缓冲液的pH值过高或过低导致的。您可以尝试调整pH值到6.8-7.8之间，看看是否有所改善。此外，电泳温度过高也可能导致此问题，您可以降低电流或将电泳槽放在冰上进行电泳以降低温度。2.蛋白质条带分离不良：这可能是由于电泳缓冲液中离子浓度过高或者不均匀导致的。您可以尝试调整离子浓度或者尝试新鲜制备电泳缓

1 回答2019 围观

问BMDM消化 M2与T共培养

loveliufudan

如果您想消化MO并重新铺板做M2极化，可以将MO收获后通过特定方法消化，比如使用0.05%胰蛋白酶-EDTA等试剂进行消化。消化时间可以根据实验需要和所用试剂进行优化。通常，消化时间在10-30分钟之间，可以通过观察细胞状态来决定是否需要延长或缩短消化时间。消化后重新铺板并进行M2极化，可以使用一些常规的方法，如IL-4和IL-13等促进M2极化的因子。此外，与T细胞的共培养也是可能的，但是需要具

2 回答1912 围观

问请问如何提取耳蜗基因组？

loveliufudan

1.收集样本首先需要收集耳蜗样本。可以使用小鼠、人类或其他动物的耳蜗组织，根据实验需要选择。2.细胞裂解将收集的样本置于液氮中，然后用组织破碎机或手工研磨器将样本细碎。加入1x PBS液体，彻底混合，最好放到冰上搅拌15-30分钟，以细胞裂解液裂解细胞膜并释放DNA。这里建议加入蛋白酶抑制剂，以防止DNA降解。3.提取DNA加入适量的DNA提取试剂（如膜分离试剂、异硫氰酸盐、酚/氯仿等），并进行高

1 回答580 围观

问细胞培养出现了许多细胞碎片该怎么办？如何避免？

橙汁儿青柠味

可以通过pbs多洗涤，消化离心去上清等从而去除细胞碎片，主要注意控制胰酶消化时间，防止过度吹打细胞

4 回答6684 围观

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