细胞培养出现了许多细胞碎片该怎么办？如何避免？

可以通过pbs多洗涤，消化离心去上清等从而去除细胞碎片，主要注意控制胰酶消化时间，防止过度吹打细胞

以下是一些建议以减少细胞碎片的产生和处理细胞碎片的方法：

1.避免过度搅拌

过度搅拌可能导致细胞破裂和碎片的产生。因此，在培养过程中应尽可能避免搅拌过度，特别是在离心和重悬时。

2.适当控制细胞密度和培养时间

高密度和长时间的细胞培养可能会导致细胞自发破裂和碎片产生。因此，在培养过程中应适当控制细胞密度和培养时间，以避免产生大量细胞碎片。

3.使用合适的培养基和培养条件

不同的细胞类型需要不同的培养基和培养条件，应根据实验需要选择合适的培养基和培养条件。例如，使用过期或不适当的培养基，或使用过时的细胞系可能会导致细胞破裂和碎片产生。

4.处理细胞碎片

如果已经出现了大量的细胞碎片，可以考虑使用不同的处理方法，如离心和筛选。离心可以分离细胞和碎片，筛选可以分离较大的碎片。但这些处理方法也可能导致细胞死亡和功能损失，因此应慎重考虑。

细胞碎片处理方法：

细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞已经分泌的分泌泡，可以先换液后用PBS润洗清除，润洗不能清除的可以消化完成后加培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。

如何避免：

将细胞用 PBS 洗 2~3 遍，洗的时候，轻轻拍打培养瓶，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去 PBS，消化时先加低浓度的胰酶如 0.05% 胰酶消化 1 min 左右，让细胞间隙中的颗粒和碎片脱落下来，去掉低浓度胰酶，然后正常消化细胞，将收集的细胞悬液慢速离心（500~600 rpm/min，5~6 min）并更换新的培养瓶，并可以尝试适当增加血清浓度进行培养。

使用PBS轻柔清洗细胞。为避免碎片产生，在保证培养条件稳定的前提下，传代过程中避免过度消化，尽量轻柔吹吸。