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        WB检测GFP融合蛋白,条带大小不对

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_lywi9f05

        WB检测GFP融合蛋白,条带大小只有GFP大小,与目的蛋白融合GFP后的大小不一致,求大神指导一下这种情况应该怎么解决?

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        3 个回答

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        你可以送个测序看看融合成功没有,如果确定融合成功那可能是融合蛋白的结构就是这样

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能是由于以下几个原因:

        目的蛋白融合GFP后的蛋白质折叠发生改变,导致抗体无法识别目的蛋白的特异性表达区域。这种情况下,建议尝试更换抗体,或者使用不同的抗体进行检测。

        目的蛋白融合GFP后的蛋白质含量较低,导致条带大小与GFP相似。这种情况下,可以尝试增大加载样品的量,或者使用更敏感的检测方法。

        目的蛋白融合GFP后的蛋白质降解或者聚集,导致条带大小发生改变。这种情况下,建议在提取过程中加入蛋白酶抑制剂等,以避免蛋白质的降解或聚集。

        蛋白质分子量的误差。Western blot实验中,分子量标记物的选择、泳道大小和分离条件的优化等因素可能影响蛋白质分子量的准确度。建议在实验中注意这些因素的影响,并根据实际情况进行优化和调整。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑融合复合物生成失败,条带还是GFP的条带,建议延长融合时间

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