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问
WB曝光的时候只有marker条带,是怎么回事,其他的蛋白都条带一点没有,重做一遍结果一样,是什么原因?
loveliufudan
当在Western Blot实验中只观察到marker条带而没有其他蛋白条带时,可能存在以下原因: 1. 样品加载量不足:确保您在加载样品时使用足够的蛋白量。如果加载量过低,可能导致蛋白条带无法被检测到。尝试增加加载量以获得更明显的蛋白条带。 2. 蛋白转移问题:确认蛋白成功转移到膜上。检查转膜的效率,确保蛋白在电泳过程中正确地转移到膜上。您可以使用Ponceau S染色或其他蛋白质染色方法来验证
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问
加入loading buffer后再重新蛋白定量影响有多大。
麻黄连翘赤小豆
重新蛋白定量肯定不准,且没有必要,溴酚蓝是一种常用的电泳指示染料,蛋白定量一般在加loading buffer之前
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问
IPTG诱导大肠杆菌实验中,大肠杆菌培养多久可加IPTG进行诱导?
Eule科研顺利
摇到OD=0.6-0.8之间 加入IPTG
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问
如何确立高效液相色谱法测定有关物质的方法?
凌晨三点Dxy
确立高效液相色谱法测定有关物质的方法需要以下步骤:确定检测目标:确定需要测定的物质,如药品、食品、化妆品等。选择色谱条件:根据目标物质的特点,选择合适的色谱柱、流动相、流速等条件。确定检测波长:选择合适的检测波长,通常选择最大吸收波长或者常用波长。制备标准溶液:制备目标物质的标准溶液,并确定标准曲线。进行样品处理:将样品进行处理,如过滤、萃取、浓缩等。进行色谱分析:将样品注入色谱柱,进行分离分析。
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问
western blot 用牛奶封闭和BSA封闭有什么区别?什么时候用BSA封闭?
feixue7758527w
我还是觉得脱脂牛奶封闭更适合普通WB实验的,BSA比较贵,对于牛奶封闭后背景比较杂或者信号高的,可以考虑BSA封闭的。
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问
ITC实验,结果请教!
sswei
ITC实验中的配体或者受体遭到杂质的干扰。
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问
液相实验中,对照品溶液的制备是如何制备的?比如绿原酸标准品,制成每1ml含有多少mg的绿原酸?这些都是根据什么来的?
sswei
需要配制绿原酸标准品溶液,可以按照以下步骤进行:1. 准备所需材料:绿原酸粉末、去离子水、容量瓶、移液管等。2. 称取适量的绿原酸粉末,根据需要的浓度和体积计算出所需的质量。3. 将绿原酸粉末加入容量瓶中,加入适量的去离子水,摇匀溶解。4. 加入足够的去离子水,使溶液体积达到容量瓶的刻度线。5. 用移液管将溶液充分混合,确保溶液均匀。6. 最后,用标准量筒或移液管取出所需的体积,即可得到所需浓度的
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问
包涵体复性后颜色偏棕色?
土井挞克树
考虑是包涵体之前就有色素沉着或污染,与操作过程关系不大
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问
WB求助
feixue7758527w
我觉得还是制胶的时候那个孔没弄好,否则其他条带不错,这个好像不行的,冲洗一下加样孔试试
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问
毕赤酵母诱导表达
dxyc42u
一般是吸取上清的,需要超声破碎的
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问
WB显色内参(42kd)的条带很清楚,目的(34kd)条带没有,但是目的条带上的marker出来了
dxyc42u
应该是目的蛋白太少了,排查下看看目的蛋白有没有降解
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问
原核表达胶图
晓雨知春来
如果量少的话可以直接选择大肠杆菌表达系统。
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问
求助,液相基线不平
dxyc42u
很多时候,水的质量有问题。换水,抽滤。
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问
请大家帮忙,WB条带分析
feixue7758527w
我觉得还是建议延长封闭时间,减少转膜时间,保证转膜的时候冰块充足的。
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问
WB电泳晕开了是什么情况
麻黄连翘赤小豆
胶的问题,可能是浓缩胶和分离胶的tris-HCl的ph有问题也可能是电泳液PH问题loading buffer的问题
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问
肌球蛋白检测
dxyc42u
通过特异的试剂盒进行反应进行检测
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问
分泌性蛋白
dxyc42u
分泌性蛋白是指分泌到细胞膜外的蛋白质。分泌性蛋白通过内分泌、旁分泌、自分泌等途径发挥作用。可以作用于自身细胞
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问
90kDa目标蛋白条带弥散,背景高
loveliufudan
下面列举一些常见的可能性: 1. 过量样品加载:如果您在电泳过程中加载了过多的样品,蛋白质条带可能会变得模糊并且背景信号增加。尽量控制好加载的样品量,确保在适当范围内。 2. 没有足够的堆积凝胶:堆积凝胶是电泳中分离蛋白质的重要部分,如果堆积凝胶不够厚或质量不好,可能导致蛋白质条带弥散和背景增加。确保使用质量良好的堆积凝胶,并按照正确的程序进行制备。 3. 电泳条件不当:电泳条件对于蛋白质分离的效
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问
琼脂糖凝胶电泳
dxyc42u
可能是因为你的胶浓度偏低,或者质量不是很好导致分辨率不好。酶切后拖带,更加提示是胶的质量不好。建议换用高质量的胶
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问
想问各位前辈,如何提取乙酰胆碱转移酶?
晓雨知春来
可以用柱层析提取法提取乙酰胆碱转移酶。
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