123慢慢学up
转膜液浓度10% 抗体1:500
膜是0.2做出来的结果
请问大家还有什么要改进么
dxyc42u
应该是目的蛋白太少了,排查下看看目的蛋白有没有降解
土井挞克树
增加目的蛋白上样量,看转膜条件还可以,考虑是上样太少的原因
loveliufudan
这可能是由于以下原因导致的:
1. 抗体浓度:尝试调整抗体的浓度。有时候,使用更高浓度的抗体可以增强目的蛋白的检测灵敏度。你可以尝试使用更高的抗体浓度(例如1:200或1:100)来增加目的蛋白的信号。
2. 转膜条件:确认转膜条件是否适当。可能需要调整转膜电流和时间,以确保蛋白能够完全转移到膜上。另外,确保使用高质量的膜,如PVDF膜或Nitrocellulose膜。
3. 蛋白质提取:检查蛋白质提取的方法和缓冲液的成分。确保充分破碎细胞并溶解蛋白质。选择适当的细胞裂解缓冲液,并添加蛋白酶抑制剂以保护蛋白质免受降解。
4. 目的蛋白表达水平:确认目的蛋白的表达水平是否足够高以被检测到。如果目的蛋白表达较低,可能需要使用更敏感的方法,如增加加载样品的量或延长暴露时间。
5. 验证抗体特异性:确保所使用的抗体对目的蛋白具有特异性。可以通过其他方法(如免疫染色或其他免疫检测方法)来验证抗体的特异性。
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