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        WB求助

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        红色的毛毛

        想问问各位,GAPDH,10%的分离胶。90v,30min;120v,1h. 转膜250mA,40min,为什么跑出来条带重影了图片描述

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        3 个回答

        user-title

        feixue7758527w

        有帮助

        我觉得还是制胶的时候那个孔没弄好,否则其他条带不错,这个好像不行的,冲洗一下加样孔试试

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        这是目的蛋白有降解,可以重新上样再跑

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        有以下几个可能的原因:

        1. 转膜条件不合适:转膜条件包括电流强度、时间和电极大小。如果转膜条件不正确,可能导致蛋白质在膜上移动不均匀,从而出现条带重影。你可以尝试调整转膜条件,如减少转膜时间或调整电流强度,以改善转膜效果。

        2. 样品加载量过多:如果加载的样品量过多,蛋白质在凝胶中可能会堆积过多,导致条带重影。尝试减少加载样品的量,以保证蛋白质能够在凝胶中均匀分布并得到清晰的条带。

        3. 凝胶均匀性问题:如果凝胶的均匀性不好,例如凝胶的聚合过程中可能出现气泡或不均匀的混合,会导致蛋白质在凝胶中分布不均匀,从而出现条带重影。确保凝胶制备过程中仔细操作,避免气泡和均匀混合。

        4. 电泳条件不合适:电泳条件包括电压、时间和缓冲液成分。如果电泳条件设置不当,例如电压过高或电泳时间过长,也可能导致条带重影。检查电泳条件,并根据具体实验要求进行调整。


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