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WB曝光的时候只有marker条带,是怎么回事,其他的蛋白都条带一点没有,重做一遍结果一样,是什么原因?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_kcup4ug3


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3 个回答

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loveliufudan

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当在Western Blot实验中只观察到marker条带而没有其他蛋白条带时,可能存在以下原因:

1. 样品加载量不足:确保您在加载样品时使用足够的蛋白量。如果加载量过低,可能导致蛋白条带无法被检测到。尝试增加加载量以获得更明显的蛋白条带。

2. 蛋白转移问题:确认蛋白成功转移到膜上。检查转膜的效率,确保蛋白在电泳过程中正确地转移到膜上。您可以使用Ponceau S染色或其他蛋白质染色方法来验证蛋白质转移。

3. 抗体问题:检查使用的抗体是否适用于您的样品。确保抗体具有高特异性和高亲和力。您可以尝试更换抗体,使用其他经过验证的抗体或调整抗体的浓度。

4. 蛋白质含量问题:检查您的样品中蛋白质的含量。如果蛋白质含量非常低,可能导致条带难以被检测到。尝试使用更敏感的检测方法,如增加曝光时间或使用增敏剂来提高信号强度。

5. 蛋白质的稳定性:某些蛋白质在转移过程中可能会发生降解或失去抗原性。确保您的样品处理和转膜过程中保持蛋白质的稳定性。

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土井挞克树

有帮助

一抗失效的可能性比较大,建议重新更换一抗

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sswei

有帮助

如果wb只有marker没其他条带,最可能是一抗加成其他抗体或者二抗种属加错了。

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