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如何对实验结果分析?
bsrhdnrwxlc
小于1就代表已经敲掉不表达了,就可以进行分析
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问
求助,内参基因(gapdh)CT值在15-18,目的基因的CT值比内参基因小大概14-16,这个引物还能用吗,还是怎么处理解决
dxy_37qs094
出入不大可以用。如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了管家基因是用来定量的。
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问
pcr求助
诸葛靓LR1
大概有以下可能:(1)反应的循环数不够:一般要在35个循环以上,但是过多的循环次数可增加背景值。(2)检测荧光信号的步骤有误:SYB-Rgreen法(SG法)采用的是72延伸时采集荧光信号,Taman法则是在退火结束或延伸结束时进行信号采集。(3)引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性,若是电泳条带呈弥散状,可考虑重新合成引物或探针。(4)模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的
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问
请教一个qPCR实验的生物学重复问题。
balalaLy
不用那么复杂的,你的三个sh就已经算是三次重复了
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问
PCR异常曲线,一直找不出原因
黑蛋123
可能是环境问题,或者是样本污染了,排除一下外界因素
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问
请问一下做qpcr时经常有污染,有什么方法可以去除呢
曙光karry
1.切记产物不要在实验区打开2实验区每天要酒精消毒,紫外杀菌,且实验室要多通风3有条件的话,加模板不要每次在同一个超净台操作
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问
菌液PCR有条带,但是送测序提质粒无条带?
朵朵可可果果
菌夜转入大肠埃希,所以才会不显示
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问
荧光PCR扩增曲线问题?
bamboopiggy
没有扩增曲线可能是你的目的基因含量太低,所以没有扩增曲线
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问
反转录失败,p不出条带,求指教!
曙光karry
1. cdna 梯度稀释3-4个浓度 2换一个反转录的盒子做一下
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问
实验新手求救,太神奇了竟然跑不出来。。。
bamboopiggy
你的模版怎么保存的?一般这种情况考虑模版降解了
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问
请教下,PCR条带总不在同一条线上,通常什么原因?
桃之zbx
1.有可能是胶配置的不均匀,电泳液的浓度以及电压的时间不合适这类操作问题。2.目标片段是否是一样大?模板的纯化程度不高?3.有没有可能你的核酸降解了呀(猜的)总之,换新鲜的电泳液,合适浓度的胶,电压可以适当调低一些,用新鲜的模板,祝你实验成功呀~
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问
当real time pcr方法做出来的目的基因ct值35左右,溶解曲线也还可以 这个结果能用么
kingh39
还要看你的内参基因的CT值,内参基因的值在15-20之间比较好。
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问
关于pcr方法的, 什么时候选用探针法比较好。能讲讲探针法和普通引物法的区别么
juyue2010
做基因突变检测,或者特异性要求比较高的检测用探针法
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问
pcr跑了几个循环了,发现八连排盖子没盖,于是停了加上盖子重新开始,会有影响吗?
dgx2005
会有影响,高温导致水分蒸发影响浓度。开盖导致交叉污染风险比较高。
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问
子宫内膜组织-80℃储存后提取RNA
balalaLy
标本取出来后放到rna保存液中再放入-80,这样可以保存比较长时间。
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问
跑pcr没有条带咋回事呢?
天一湖医者
可能原因:1.引物的特异性较差。这种情况下,可能会出现很难消除的非特异性扩增;如果模板 好的话,多半会有目的片断出现。2.模板不好。比如,RNA 提取得不好,里面有基因组 DNA 污染或 RNA 降解比较严重, 最终导致 cDNA 的质量不好。
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问
荧光定量引物验证只能在组织样里出现?
洛噜啦噜啦嘞
是不是细胞培养量太少?建议把细胞量提高一下。
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问
做兼性菌在好氧和厌氧条件时q-PCR相对定量的问题?
土井挞克树
可能是检测误差的问题,好氧的生长应该受抑制。
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问
各位老师,四组小鼠差异基因不一样,该怎么分析
菜鸟较瘦
应该是分析小鼠睡眠剥夺时间与差异基因表达之间的关系,用单因素方差分析么
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问
18S pPCR实验求助
doctor_dfm5
通常是250bp,这个确实太长了,可以换短点的
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