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        反转录失败,p不出条带,求指教!

        相关实验:反向 PCR (inverse-PCR)

        user-title

        大海带

        图片描述

        这个是rna的琼脂糖凝胶电泳图,

        预变性:oligo dt(1ul)和n6(0.5ul)70℃,10min,4℃,2min

        反转录:m-mlv,RRI,10mm dntp,5x mlv buffer

        42℃,60min,70,10min

        选择实验室用的植物actin的引物,做pcr,30循环,跑胶图片描述

        前十二个是我的cdna跑胶图,依次是经过不同处理的根茎叶,根茎叶,根茎叶,根茎叶。

        为什么根里的rna没有发生降解,但是用它反转录出来的cdna,pcr之后就跑不出来我的actin条带?

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        4 个回答

        user-title

        曙光karry

        有帮助

        1. cdna 梯度稀释3-4个浓度 2换一个反转录的盒子做一下

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        是不是经过你的处理后,植物的actin在这里不适合做内参?

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        第一步有没有迅速降温,去除RNA的二级结构?

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        有可能是反转录的cdna重复区域太多或者存在二聚体。

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