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        pcr求助

        相关实验:双重 PCR 实验

        user-title

        luck23

        PCR碰到个问题,就是一组只有内参有CT值,目的蛋白没有CT值,而另外一组组内参和目的蛋白都有CT值,想问问这是什么原因?

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        3 个回答

        user-title

        诸葛靓LR1

        有帮助

        大概有以下可能:

        (1)反应的循环数不够:一般要在35个循环以上,但是过多的循环次数可增加背景值。


        (2)检测荧光信号的步骤有误:SYB-Rgreen法(SG法)采用的是72延伸时采集荧光信号,Taman法则是在退火结束或延伸结束时进行信号采集。


        (3)引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性,若是电泳条带呈弥散状,可考虑重新合成引物或探针。


        (4)模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。


        (5)模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。


        (6)序列或者引物有误:检测样品中不含有待检测基因。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        第一目的基因设计的引物有问题,导致目的基因测不出CT值;

        第二没有做模板梯度稀释的预实验,导致稀释倍数过大,或者目的基因本身丰度较低,就导致测不出CT值。

        第三:定量设置出现问题,目的基因的CT值没有显示出来。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑还是目的基因的引物问题,重新设计引物试一下

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