请问高浓度模板反而 CT值更大甚至检测不到？

模板浓度和纯度都会影响，如果纯度不够有杂质反而会抑制反应，另外可以大致换算一下拷贝数，初始模板10^5-10^8 copies 比较合适

溶解曲线单峰，那么温度值是多少？如果低于80很有可能都是引物二聚体，有没有阴性对照？看阴性对照的值和样品值是否相近。内参都那么大的值，很怀疑模板有问题，或者引物有问题啊，你可以先跑个普通pcr试试，看看能否跑出单一目的条带。

需要稀释模板，一般DNA量差不多为10ng，过多模板抑制PCR

重新调节仪器的基线，调到二者相符的情况。