实验问答21,902,822 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问GPCR表达

z流沙z

ncbi上面能够找到基因序列，购买表达质粒的话可以去一些生物公司咨询

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问qPCR的ct值

z流沙z

这是很正常的啊，不同基因的基准表达水平不一样，到达平台期的扩增数不一样，自然ct值不一样

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问RPA扩增产物不能与Cas12a反应

土井挞克树

因为RPA的扩增产物会激活Cas12a酶的切割活性，然后被顺式切割导致模板失效，所以不与Cas12a反应。

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问qpcr时，三次生物学重复之间ct值差很多，连带着内参也差很多，但是技术重复相差不大，是不是cdna质量不好或者稀释太大了

秋秋欣欣

保证每次稀释比都差不多就可以了，可能你试剂或者技术还不太好

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问引物在几个样本中产生的引物二聚体片段一样吗

z流沙z

引物二聚体都很小，差不多位置，主要是由于引物自身或者引物之间的结合，建议重新设计减少引物的互补

3 回答331 围观

问请问跑Qpcr时，内参基因跑不齐，但是目的基因可以跑齐是什么原因呢？

loveliufudan

如果内参基因在不同样品中跑不齐，但目的基因可以跑齐，可能是由于以下原因：内参基因在所研究的生物学过程中会发生变化，导致其表达量在不同样品中存在差异。而目的基因的表达则受到其他因素的影响，与内参基因的变化不一定一致。实验操作中可能存在技术误差，例如RNA提取和反转录的效率、PCR反应的稳定性等，这些因素也可能导致内参基因的表达量存在差异，从而影响QPCR结果的准确性。在这种情况下，建议重新选择一个稳

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问pcr产物大小不对，且非目标条带比目标条带亮，引物是直接用的外文文献里面的

z流沙z

这都是非特异性的条带。如果有目的条带还行，可以升高退火温度以减少非特异性条带。但如果都没有目的条带，引物基本不行了。虽然是参照文献，但也不一定好用，应该去ncbi上面blast一下以保证引物的特异性。

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问求助求助

z流沙z

可以进行，设置好分组，比如两个单独使用，两个联合使用，以及相应的对照

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问PCR跑胶目的片段大小不对

z流沙z

一般就是非特异性的条带，设计完引物后应在ncbi上面blast一下，确保引物的特异性

3 回答1077 围观

问从骨组织提取RNA，求浓度大概为多少

土井挞克树

提取的骨组织RNA浓度一般在0.80～0.90g/L

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问可以把复合性肥胖作为中心性肥胖处理吗？

loveliufudan

复合性肥胖是指同时存在中心性肥胖和全身性肥胖的一种肥胖类型。复合性肥胖与一般肥胖或中心性肥胖相比，具有更高的心血管病风险和炎症水平。因此，复合性肥胖应该作为一种特殊的肥胖类型进行诊断和治疗，而不是简单地将其归为一般肥胖或中心性肥胖。目前，没有找到关于复合性肥胖的指南或共识，但是有一些文献对复合性肥胖的定义、流行病学、危险因素和干预措施进行了探讨，你可以参考以下几篇：1 陈晓娟, 王晓梅, 李晓娟.

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问pcr 扩增图谱很乱！！！

z流沙z

这个压根没有扩增出来。首先确定cDNA模板没有问题，然后先不稀释并增加上样量，先保证能扩增出来再根据ct值摸索最佳稀释比例。其次确定qpcr引物，在ncbi上面blast或者对照发表的文献，保证引物的特异性。最后qpcr试剂需要全程避光。

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问qpcr ct值高

sswei

有几个可能性。1、最有可能是RNA降解严重。2、逆转可能出问题，可能是逆转试剂有问题，也可能逆转程序没设置好，也可能是逆转前RNA没有预热变性。3、有DNA污染，可能在抽提的时候有DNA混进去了。

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问请问我的qPCR曲线怎么了啊？

sswei

主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高，引物浓度太高等。

3 回答443 围观

问逆转录和扩增体系不一致可以吗？

sswei

在逆转录和扩增反应中使用不相同的反应体系，会严重影响反应过程引起反应结果变化，对实验结论发生偏差，从而不能得出正确结论。

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问BMC系列杂志交了版面费，但是系统却一直发催缴APC邮件，也没有Proof，有遇到过的吗

loveliufudan

如果您已经填写了出版协议并交了版面费，那么您的稿件应该已经进入出版流程，这时候您会开始接收到关于APC催缴的邮件。通常情况下，这些催缴邮件是自动发送的，因此在您已经完成了版面费缴纳的情况下，可能需要一些时间才能使系统更新状态。如果您已经与编辑联系过，并且他们也无法解决问题，您可以考虑联系出版社的客服部门或者编辑部门的其他人员，询问相关情况，看是否可以得到更好的解决方案。您也可以考虑在投稿系统中留言

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问我的适配体才36bp,要怎么设计引物

土井挞克树

有5'UTR和3'UTR，在这个两个区域设计引物，然后引物一定要有一部分在你的目的基因上，否则，很难判断你的扩增产物是不是你的目的基因的扩增产物

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问实时荧光定量PCR扩增曲线平台期上扬是为什么？

loveliufudan

实时荧光定量PCR扩增曲线平台期上扬可能由以下几个原因引起：PCR反应物质不足：如果PCR反应体系中模板DNA、引物、探针或dNTP等的浓度不足，会导致PCR反应速率降低，扩增曲线出现平台期上扬现象。初始DNA浓度过高：在PCR反应开始时，如果DNA模板的浓度过高，可能会在早期扩增时产生大量产物，导致引物和其他反应物质过早耗尽，使得PCR扩增速率降低，从而形成平台期上扬。PCR反应物质质量差：如果

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问PCR跑胶时目的引物和GAPDH引物同时进行逆转录扩增，为什么会出现Gapdh引物跑胶出现拖影?

loveliufudan

同时进行PCR反应时，不同引物之间可能存在相互干扰的情况。其中，GAPDH引物比目的引物更容易引起拖影的原因有以下几个可能：GAPDH是高表达基因，GAPDH引物的扩增产物数量可能比目的引物多，如果模板DNA量过多或扩增的周期过多，就会产生非特异性扩增，从而形成拖影。GAPDH引物的Tm值相对较低，可能会与PCR体系中的其他非特异性产物结合，从而形成拖影。GAPDH引物的设计可能存在问题，例如引物

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问第一次跑qpcr，要把cDNA梯度稀释，选择内参Ct值在15-20的稀释倍数作为最佳吗？为什么要这样呢？稀释关注的指标是哪些呢？

loveliufudan

在进行qPCR实验时，需要将cDNA进行适当稀释以避免反应过饱和或过稀释。选择内参Ct值在15-20之间的稀释倍数作为最佳是因为这个范围内，内参基因的表达量适中，可以提供足够的信号量并且不会因表达量过高而饱和，也不会因表达量过低而无法被检测出来。同时，稀释倍数也应该选择在能够产生可靠的信号的范围内，而不是过高或过低。选择稀释倍数的关注指标包括反应信号强度和反应效率。在反应信号强度方面，需要确保反应

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