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        RPA扩增产物不能与Cas12a反应

        相关实验:双标记签的PCR扩增

        user-title

        aoaaaa

        扩增模板都能与Cas12a反应酶切,RPA扩增产物却不行,为啥呀为啥呀

        wx-share
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        4 个回答

        user-title

        dxy_und41cs0

        有帮助

        我想请教一下 如何判定好几天rpa引物好不好用? 是同一DNA模板下 电泳 看条带亮度吗?

        user-title

        研究生小白阿尚

        有帮助

        请问毛利小五郎的徒弟老师,那我看怎么文献里面都是RPA与cas12a结合呢

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        因为RPA的扩增产物会激活Cas12a酶的切割活性,然后被顺式切割导致模板失效,所以不与Cas12a反应。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能的原因有几个可能:

        扩增产物的长度不够:RPA(Recombinase Polymerase Amplification)扩增产物的长度一般在200-400bp之间,而Cas12a酶的作用需要靶向序列长度在23-30bp之间。因此,如果扩增产物的长度太短,可能无法被Cas12a酶识别和切割。

        扩增产物的序列不符合Cas12a的靶向序列:Cas12a酶是一种特异性很高的核酸酶,需要与特定的靶向序列结合才能切割DNA。如果扩增产物的序列与Cas12a酶的靶向序列不匹配,就无法被Cas12a酶切割。

        RPA扩增反应中可能存在一些成分或产物,干扰了Cas12a酶的活性:比如,RPA扩增反应中可能存在一些特定的盐、酶或试剂,这些物质可能会影响Cas12a酶的活性。此外,RPA扩增反应还可能产生一些其他的产物,如一些非特异性扩增产物或杂交产物,这些产物也可能会影响Cas12a酶的作用。

        user-title

        aoaaaauser-title

        谢谢!

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