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        请问我的qPCR曲线怎么了啊?

        相关实验:反向 PCR (inverse-PCR)

        user-title

        天路旅客99

        大佬们,我的引物melt峰是这个样子,请问是啥原因呢?图片描述

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        3 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高,引物浓度太高等。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        引物的melt峰扩增不够理想,可能是由以下原因之一或多种共同作用导致:

        引物浓度过高或过低:如果引物浓度过高,可能会导致引物间的二聚体或聚集体形成,这会抑制PCR反应的进行,导致扩增不理想。另一方面,引物浓度过低也可能导致PCR反应的效率低下,导致扩增不理想。因此,你可以尝试优化引物浓度,以获得最佳的PCR效果。

        引物设计不合理:如果引物设计不合理,可能会导致引物与模板结合的效率低下,从而影响PCR反应的进行。因此,你可以尝试优化引物设计,例如选择更适合的引物序列,调整引物长度、Tm值等参数。

        反应体系问题:如果反应体系中存在PCR抑制物质,如胆固醇、乙醇、酚类化合物等,可能会影响PCR反应的进行,导致扩增不理想。此时,你可以尝试优化反应体系,例如纯化模板等。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        引物峰扩增不理想,建议更换引物。

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