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        求助 | IP的input组出现了小分子量强表达杂带是怎么回事?

        相关实验:质粒的制备

        user-title

        dxy_dpvveli7

        图片描述

        如图所示,阴性是转了空载的293T,阳性是转了过表达质粒的293T,目的蛋白TRIM5大小是56kd。WB后input组出现了一条很强的杂带,分子量在35-40kd之间,IP之后就没有了,本来要送IP-MS的,现在不敢送。大家能给点意见是为啥吗?

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        2 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        这种情况可能是因为在293T细胞中表达质粒的转染过程中,在转染后的细胞中产生了一种杂合物,这种杂合物可能是由目的蛋白和其他蛋白组成的。在进行Western Blot检测时,这种杂合物被误认为是目的蛋白,因此出现了一条强杂带。在进行磷酸化质谱分析时,这种杂合物可能已经被分解,因此没有再次出现。建议您使用其他方法(如质谱)进行验证,或者使用不同的细胞系进行转染,以避免这种杂合物的产生。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        会不会是你用的裂解液强度太大了?

        user-title

        dxy_dpvveli7user-title

        请问裂解液强度大了会有什么影响呢?我用的是碧云天WB和IP裂解液

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