【求助】未加药组出现erk激活
丁香园论坛
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近日做了p-erk的WB：
不加药和加药5min的蛋白表达没有什么差别！且内源性pERK表达很高。16小时的撤血清对其表达似乎没有影响。
两个月前找别人借的一点pERK抗体，做的结果能看到撤血清后ERK激活减明显少了，加药组比不加药组的激活明显得多。
郁闷得很，不知道原因出在哪儿，有经验得兄弟姐妹们给点意见吧~~谢了！
不加药和加药5min的蛋白表达没有什么差别！且内源性pERK表达很高。16小时的撤血清对其表达似乎没有影响。
两个月前找别人借的一点pERK抗体，做的结果能看到撤血清后ERK激活减明显少了，加药组比不加药组的激活明显得多。
郁闷得很，不知道原因出在哪儿，有经验得兄弟姐妹们给点意见吧~~谢了！
ERK的信号激活非常灵敏，本身就叫做细胞外信号调节激酶，对外界环境变化相当敏感，就是六孔板放的时候用力振一下也可能会激活ERK磷酸化，所以操作一定要很小心。还有一个就是如果你的受体或激酶是有自发激活的（constitutive activated），那也会产生这种现象。
谢谢楼上的回复。我又重做了，看看怎么样。
做了，还是跟以前一样。且一批蛋白在冰箱里放两天，砸出来的也不一样了。
做了，还是跟以前一样。且一批蛋白在冰箱里放两天，砸出来的也不一样了。
我这边一个大牛说，细胞皿掉到地上，然后捡起来，杂一杂信号通路，erk都会有变化。。
汗啊。
汗啊。
快把月球拿下来,我要上去做实验....
nopain wrote:
谢谢楼上的回复。我又重做了，看看怎么样。
做了，还是跟以前一样。且一批蛋白在冰箱里放两天，砸出来的也不一样了。
我也发现，前几天的蛋白，今天重新定量的时候发现含量降低很多。
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