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        【求助】co-IP

        丁香园论坛

        2095
        做IP,之后Western 分析,看到有两条带,在25和50KD左右,应该是抗体的两条带,但是我的目的蛋白也是52KD的,这该怎么区分呢。
        最好是选择与做IP不同来源的抗体来做(比如说IP用鼠的抗体,WB就用兔的抗体),这样就不会检测到抗体的两条带。
        如果没有不同来源的抗体的话,就要做IP的时候尽量少放点抗体,跑胶跑得远一点,使得目的蛋白能够被看到,不过由于你的蛋白是在是太接近重链了,要分开难度还是很大,这时候就要很慎重,实验过程要十分肯定检测有这么一条目的条带才行。最好还是能找到不同来源的抗体啦~~
        不同种源的抗体WB验证有时在IgG位置也出现条带

        最好的办法是用洗脱buffer洗脱 如果是用tag做的IP 则用tag肽洗脱,IgG是能洗掉的
        紫叶竹韵 wrote:
        做IP,之后Western 分析,看到有两条带,在25和50KD左右,应该是抗体的两条带,但是我的目的蛋白也是52KD的,这该怎么区分呢。


        我在做IP的时候也碰到这个问题,因此有点个人经验。有一个很好的方法可以克服这个问题,即用轻链特异性的抗体,这些抗体在Jackson lab里有,我们发现重链没有任何的信号,确实很不错。网址链接:

        http://www.jacksonimmuno.com/Catalog/CatPages/rblc.asp
        多谢大家!

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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