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IL-2质粒DNA探针制备的试剂与仪器（1）含IL-2 DNA探针的质粒以及宿主菌（2）STE 溶液：0.1mol/L NaC1（3）Tris HC1(PH8.0)：10mmo1/L、1mmo1/L（4）溶液I 50mmo1/L 葡萄糖 25mmo1/L Tris HCL(PH 8.0) 10mmo1/L EDTA(PH 8.0) 可配100ml，高压灭菌15 ...

间接免疫荧光法检测样品中mIL-2Rα+阳性细胞 白介素2受体（interleukin 2 receptor， IL-2R）是能与白介素2（IL-2）特异性结合的细胞受体。IL-2R由α、β、γ链组成。IL-2R存在形成包括膜结合型IL-2R（membrane-bound IL-2R，mIL-2R）与可溶性IL-2R（solubble IL-2R，sIL-2R）。sIL-2R是由于某种因素 ...

IL-2质粒DNA探针制备的操作步骤（1）含IL-2质粒DNA探针的提取取含IL-2质粒DNA的单个菌落置两个25ml LB培养基（含100μg/ml Amp）↓37℃ 220r/min 振摇过液(约16h )取10ml菌液加200ml LB培养液(含100μg/ml Amp)↓37℃ 150r/min振摇 4h加氯霉素(终浓度170μg/ml)↓37℃ 220r/min振摇3h菌液倒入300 ...

细胞内（胞浆）细胞因子的免疫学检测法【基本原理】基本原理是应用荧光素标记的特异性抗细胞因子单克隆抗体，借助FCM免疫荧光技术（如FACS）即可从单细胞水平检测不同细胞内的细胞因子，并由此可判断产生特定细胞因子的细胞种类、细胞定位，分布密度及细胞因子与组织病变的关系等。也可将细胞裂解后，应用ELISA、RIA等技术检测细胞与细胞因子水平。现以FCM免疫荧光法检测人PBMC内的细胞因子为例加以简单介 ...

细胞因子的分子生物学检测法 细胞因子基因的检测包括对其DNA的检测和mRNA表达水平的检测。特定细胞因子mRNA表达水平的检测有助于判断细胞表达该细胞因子的水平；而细胞因子DNA的检测可以判断该细胞因子基因存在与否及其变异情况。常用的方法有Southern印迹、斑点印迹、PCR，原位杂交及原位PCR等，Northern印迹及RT-PCR。这里简要介绍常见细胞因子mRNA表达水平的检测。一 ...

培养细胞RNA的提取（采用Trizol试剂盒提取RNA）【试剂与仪器】（1） RNA提取试剂：TRIZOL试剂（Gibcol No15596-026）（2） DEPC处理的双蒸水，乙醇（3） RPMI-1640，胎牛血清（FCS），ConA（刀豆蛋白A）（4） CO2培养箱（5） 无菌操作台和离心机等【操作步骤】（1 ...

斑点杂交法测定培养细胞IL-2 mRNA的含量免疫测定【试剂与仪器】地高辛标记和检测试剂盒（Boerhinger Mannheim，No1093657）【操作步骤】（1） 杂交后彻底清洗，将膜置入清洗缓冲液中1～5min；（2） 100ml封闭缓冲液（1×）中封闭30min；（3） 抗地高辛-AP复合物（75mu/ml）用封闭缓冲液（1×）1：10 ...

RNA的斑点杂交--样本RNA点膜【试剂与仪器】（1）20×SSC（标准柠檬酸盐缓冲液）（pH 7.0） NaCl 175.3g 柠檬酸钠 88.2g 加H2O至 1000ml 用10N NaOH or 10N HCl调pH至7.0，高压灭菌。（2）37%甲醛（3）甲酰胺（4）2×Denhardt液（5）硝酸纤 ...

IL-2 DNA探针的标记 地高辛是一种仅存在于洋地黄类物质花叶中的类固醇半抗原，又称异羟基洋地黄毒甙配基，地高辛精可以通过一个11个碳原子的连接臂与尿嘧啶核甘酸嘧啶环上的第5组碳原子相连接形成地高辛精标记的尿嘧啶甘酸:Boehringer Mannheim公司出售的地高辛精标记核苷酸有dig-UTP，dig-dUTP和dig-dduTP，它们分别适用于RNA探针、DNA探针和寡核苷酸探针 ...

RNA的斑点杂交--杂交【试剂与仪器】（1） 预杂交液：5×SSC，2×Denhardt液（或采用试剂盒的相应试剂），0.02%(W/V) SDS（2） 杂交液DIG Easy Hyb（3） 杂交袋（4） 含0.1%SDS 2×SSC和含0.1%SDS 0.1×SSC【操作步骤】 （1）预杂交① 先将预杂交液热至60 ...

常用的细胞因子引物表细胞因子引物序列产物(bp)IL-1a5’ ATGGCCAAAGTTCGAGACATG3’ CTACGCCTGGTTTTCCAGTATCTGAAAGTCAGT816IL-1b5’ ATGGCAGAAGTACCTAAGCTC3’ TTAGGAAGACACAAATTGCATGGTGAACTCAGT810IL-25’ ATGTACAGGATGCAACTCCTG3’ TC ...

原位杂交法测定TNF的mRNA原位杂交【试剂及配制】（1） TNF-DNA探针（2） 地高辛标记液试剂盒（3） 杂交液：60%去离子甲酰胺，300mmol/L NaCl、30mmol/L柠檬酸钠、10mmol/L EDTA 25mmol/L NaH2PO4(pH7.4)，5%葡聚糖硫酸酯，250μg/μl变性鲑精DNA（4） 设备： ...

瑞氏（wright）染色法检测细胞凋亡【材料与试剂】Wright染液：称取Wright粉剂0.1g在碾钵内，充分碾磨，量取甲醇60ml，逐步加入，边加边碾磨，直到染料全部溶解，置试剂瓶中密封，1周后可用。Wright磷酸盐缓冲稀释液：Wright染液10 ml，磷酸盐缓冲液20ml。磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾6.63g，磷酸氢二钠2.56g，蒸馏水1000ml。染色缸，离心涂片机，离心机，显微镜。 ...

细胞样本的制备、固定及增加其通透性【试剂及设备】（1） 培养基；不含酚红的DMEM培养基（2） 处理玻片：将多聚赖氨酸溶液（溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl缓冲液中），涂布于玻片上，干燥后即可使用。或者APES 2ml溶于100ml丙酮中，将玻片浸泡入内，取出晾干，180℃干燥备用。（3） 洗涤液；0.1M，pH7.2～7.4PBS（ ...

苏木素-伊红染色法（HE染色法）检测细胞凋亡 凋亡检测中形态学方法是最直观、可靠的方法之一。对组织和各种细胞进行染色后，在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察，通过观察细胞的形态或染色的类型来判断凋亡的发生与否。【材料及试剂】（1）苏木素液：先将2.5g苏木素溶于25.0ml乙醇中，再将预先已溶有2.5g明矾的蒸馏水500ml加入苏木素乙醇溶液中，煮沸后将火焰熄灭，慢慢加入1.25g氧 ...

PI染色法（活细胞染色）检测细胞凋亡【染料及试剂】（1） 含0.1%TritonX-100的PBS缓冲液（pH7.4）（2） PI染液:将PI（碘化丙啶）溶于含0.1%TritionX-100的PBS中，终浓度为50μg/ml，含RNase 100μg/ml，避光保存。（3） 荧光显微镜【操作方法】制备凋亡细胞悬液，浓度为106/ml；取1ml的 ...

DAPI染色法检测细胞凋亡【材料与试剂】含0.1%Triton X-100的PBS缓冲液；DAPI染料（4，6-diamidino-z-phenylindole）100μg，溶于100ml含0.1%TritionX-100的PBS缓冲液中，避光保存。【操作方法】将制备好的石蜡切片按常规脱蜡、水化（按HE染色的脱蜡方法），用PBS洗5min；或冰冻切片用冰丙酮固定15min，吹干，用PBS洗５m ...

Hoechst33258（或Hoechst33342）染色法检测细胞凋亡【材料与试剂】Hoechst33258染液：称取Hoechst33258（或Hoechst33342）1mg，用20ml蒸馏水溶解，过滤，4℃避光保存。用时用蒸馏水10倍稀释成染色液，pH7.0。固定液：4%多聚甲醛。荧光显微镜。【操作方法】将制备好的石蜡切片按常规脱蜡、水化，用PBS洗5min；或冰冻切片用冰丙酮固定15 ...

Hoechst/PI双标记法检测细胞凋亡 凋亡细胞在等渗条件下进行活细胞染色，其吸收Hoechst的能力增强。因此，在活细胞中加入Hoechst染料，凋亡细胞很快产生较强的蓝色荧光，其强度要比坏死的和活的细胞大得多。Hoechst/PI双标记法是目前细胞凋亡最满意的形态学分析方法。先用Hoechst进行活细胞染色，再进行PI染色，并与细胞光散射性质测定结合起来。Hoechst/PI双标记法 ...

AO染色法（丫啶橙染色法）检测细胞凋亡【材料与试剂】pH4.8～6.0 Tritionx-100的PBS缓冲液， AO染料：将AO染料溶于含1%TritionX-100的PBS中，终浓度为6μg/ml，含Rnase100μg/ml，避光保存。荧光显微镜【操作方法】制备活细胞悬液106/ml；取95μl细胞悬液，加5μl的AO染液混合、避光作用10min；加入5ml PBS，1500r/min离 ...