Hoechst/PI双标记法检测细胞凋亡
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Hoechst/PI 双标记法检测细胞凋亡
凋亡细胞在等渗条件下进行活细胞染色，其吸收Hoechst的能力增强。因此，在活细胞中加入Hoechst染料，凋亡细胞很快产生较强的蓝色荧光，其强度要比坏死的和活的细胞大得多。Hoechst/PI双标记法是目前细胞凋亡最满意的形态学分析方法。先用Hoechst进行活细胞染色，再进行PI染色，并与细胞光散射性质测定结合起来。Hoechst/PI双标记法也适用于不发生DNA断裂的凋亡细胞的测定。
【材料与试剂】
Hoechst 33342储存液（0.1mg/ml）：配制方法同上述。
PI储存液（1mg/ml）：配制方法同上述。
PBS
培养细胞或离体细胞制成的单细胞悬液。
【操作方法】
将106 个细胞悬浮于1ml培养基（含10%小牛血清）中，加入10μl Hoechst33342储存液，混匀；
置于37℃温育5～15min；
将细胞置于冰上冷却后，于4℃离心，去除上清；
将细胞重新悬浮于1ml PBS中，加入5μl PI储存液，混匀，37℃复染10~15min；
PBS洗涤，用荧光显微镜观察分析；
【结果判断】
在荧光显微镜下观察，凋亡细胞的蓝色荧光比活细胞和非凋亡细胞都要强，其光散射能力则降低，将二者结合起来，可以很好地鉴定凋亡细胞。坏死细胞则由于PI复染，呈红色荧光。
