抗原设计

IL-2质粒DNA探针制备的试剂与仪器（1）含IL-2 DNA探针的质粒以及宿主菌（2）STE 溶液：0.1mol/L NaC1（3）Tris HC1(PH8.0)：10mmo1/L、1mmo1/L（4）溶液I 50mmo1/L 葡萄糖 25mmo1/L Tris HCL(PH 8.0) 10mmo1/L EDTA(PH 8.0) 可配100ml，高压灭菌15 ...

间接免疫荧光法检测样品中mIL-2Rα+阳性细胞 白介素2受体（interleukin 2 receptor， IL-2R）是能与白介素2（IL-2）特异性结合的细胞受体。IL-2R由α、β、γ链组成。IL-2R存在形成包括膜结合型IL-2R（membrane-bound IL-2R，mIL-2R）与可溶性IL-2R（solubble IL-2R，sIL-2R）。sIL-2R是由于某种因素 ...

RNA的斑点杂交--杂交【试剂与仪器】（1） 预杂交液：5×SSC，2×Denhardt液（或采用试剂盒的相应试剂），0.02%(W/V) SDS（2） 杂交液DIG Easy Hyb（3） 杂交袋（4） 含0.1%SDS 2×SSC和含0.1%SDS 0.1×SSC【操作步骤】 （1）预杂交① 先将预杂交液热至60 ...

培养细胞RNA的提取（采用Trizol试剂盒提取RNA）【试剂与仪器】（1） RNA提取试剂：TRIZOL试剂（Gibcol No15596-026）（2） DEPC处理的双蒸水，乙醇（3） RPMI-1640，胎牛血清（FCS），ConA（刀豆蛋白A）（4） CO2培养箱（5） 无菌操作台和离心机等【操作步骤】（1 ...

斑点杂交法测定培养细胞IL-2 mRNA的含量免疫测定【试剂与仪器】地高辛标记和检测试剂盒（Boerhinger Mannheim，No1093657）【操作步骤】（1） 杂交后彻底清洗，将膜置入清洗缓冲液中1～5min；（2） 100ml封闭缓冲液（1×）中封闭30min；（3） 抗地高辛-AP复合物（75mu/ml）用封闭缓冲液（1×）1：10 ...

苏木素-伊红染色法（HE染色法）检测细胞凋亡 凋亡检测中形态学方法是最直观、可靠的方法之一。对组织和各种细胞进行染色后，在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察，通过观察细胞的形态或染色的类型来判断凋亡的发生与否。【材料及试剂】（1）苏木素液：先将2.5g苏木素溶于25.0ml乙醇中，再将预先已溶有2.5g明矾的蒸馏水500ml加入苏木素乙醇溶液中，煮沸后将火焰熄灭，慢慢加入1.25g氧 ...

细胞样本的制备、固定及增加其通透性【试剂及设备】（1） 培养基；不含酚红的DMEM培养基（2） 处理玻片：将多聚赖氨酸溶液（溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl缓冲液中），涂布于玻片上，干燥后即可使用。或者APES 2ml溶于100ml丙酮中，将玻片浸泡入内，取出晾干，180℃干燥备用。（3） 洗涤液；0.1M，pH7.2～7.4PBS（ ...

原位杂交法测定TNF的mRNA原位杂交【试剂及配制】（1） TNF-DNA探针（2） 地高辛标记液试剂盒（3） 杂交液：60%去离子甲酰胺，300mmol/L NaCl、30mmol/L柠檬酸钠、10mmol/L EDTA 25mmol/L NaH2PO4(pH7.4)，5%葡聚糖硫酸酯，250μg/μl变性鲑精DNA（4） 设备： ...

瑞氏（wright）染色法检测细胞凋亡【材料与试剂】Wright染液：称取Wright粉剂0.1g在碾钵内，充分碾磨，量取甲醇60ml，逐步加入，边加边碾磨，直到染料全部溶解，置试剂瓶中密封，1周后可用。Wright磷酸盐缓冲稀释液：Wright染液10 ml，磷酸盐缓冲液20ml。磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾6.63g，磷酸氢二钠2.56g，蒸馏水1000ml。染色缸，离心涂片机，离心机，显微镜。 ...

Hoechst33258（或Hoechst33342）染色法检测细胞凋亡【材料与试剂】Hoechst33258染液：称取Hoechst33258（或Hoechst33342）1mg，用20ml蒸馏水溶解，过滤，4℃避光保存。用时用蒸馏水10倍稀释成染色液，pH7.0。固定液：4%多聚甲醛。荧光显微镜。【操作方法】将制备好的石蜡切片按常规脱蜡、水化，用PBS洗5min；或冰冻切片用冰丙酮固定15 ...

Hoechst/PI双标记法检测细胞凋亡 凋亡细胞在等渗条件下进行活细胞染色，其吸收Hoechst的能力增强。因此，在活细胞中加入Hoechst染料，凋亡细胞很快产生较强的蓝色荧光，其强度要比坏死的和活的细胞大得多。Hoechst/PI双标记法是目前细胞凋亡最满意的形态学分析方法。先用Hoechst进行活细胞染色，再进行PI染色，并与细胞光散射性质测定结合起来。Hoechst/PI双标记法 ...

AO染色法（丫啶橙染色法）检测细胞凋亡【材料与试剂】pH4.8～6.0 Tritionx-100的PBS缓冲液， AO染料：将AO染料溶于含1%TritionX-100的PBS中，终浓度为6μg/ml，含Rnase100μg/ml，避光保存。荧光显微镜【操作方法】制备活细胞悬液106/ml；取95μl细胞悬液，加5μl的AO染液混合、避光作用10min；加入5ml PBS，1500r/min离 ...

Annexin-V-FLUOS和PI双标记法检测细胞凋亡 凋亡早期，细胞表面可发生改变，细胞膜的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从胞膜内转移到胞膜外层，从而使PS暴露在细胞表面。在凋亡发生时，巨噬细胞能特异性识别暴露在细胞表面的PS，从而吞噬凋亡细胞和凋亡小体，使机体免于细胞内容物释出所引起的炎症反应和伴有的组织细胞坏死。Annexin-V 是一种Ca2+依赖性的磷脂结合蛋白，与PS有高度亲 ...

基于凋亡诱导蛋白酶变化的细胞凋亡检测 半胱-天冬氨酸蛋白酶家族（cysteinyl aspartate specific protease，Caspase）是近几年人们发现的与ced-3同源的一类蛋白酶，具有10余种成员。“C”代表半胱氨酸在酶的活性中心，“aspase”代表其底物切割蛋白作用位点都在天冬氨酸羧基端，这是caspase家族最为独特的催化活性。Caspase一般以非活化的酶 ...

蛋白酶PARP的测定检测细胞凋亡 聚（腺苷二磷酸-核糖）多聚酶（PARP）为一种依赖Zn2+的真核DNA结合蛋白，可特异性地识别DNA断裂末端并结合， 是一种重要的DNA修复酶。在细胞凋亡发生的早期， PARP是caspase家族（如caspase3 和7）的作用底物，后者可使PARP的DNA 修复功能丧失。Caspase可将 113kD的PARP水解为89kD和24kD的两个片断。 本方 ...

原位末端转移酶标记技术 （ISEL）检测细胞凋亡 根据细胞凋亡时核酸内切酶被激活，将细胞核染色体DNA从核小体连接处切断，产生单股或双股DNA链。根据这一生化特性，将外源性核苷酸和酶（末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和DNA聚合酶I或Klenow大片段）渗入到凋亡细胞中，催化标记的外源性核苷酸与断裂的 DNA链相结合，并通过一定的显示系统显色。 由于凋亡细胞内的内源性核酸酶被激活后， ...

免疫学方法（ELISA法）检测细胞凋亡 细胞凋亡事件发生时，会出现蛋白质和核酸分子结构的改变，形成新的表位。利用免疫学方法对这些表位进行鉴定，有助于判断样本中细胞凋亡事件的发生。细胞凋亡的发生，是由于内源性核酸内切酶的激活，这种钙和镁依赖性核酸酶容易进入的核小体间区解开双链DNA，产生单/低聚核小体片段，而核小体本身由于DNA与组蛋白H1、H2A、H2B、H3和H4形成紧密复合物而不被核酸 ...

酶标记法检测细胞凋亡【材料与试剂】（1） 平衡缓冲液；（2） 反应缓冲液；（3） TdT酶；（4） 反应终止/洗涤液；（5） 过氧化物酶标记的抗地高辛抗体；（6） 蛋白酶K消化液：20μg/ml蛋白酶K溶于PBS；（7） 30％H2O2；（8） DAB显色液：0.05％的diaminobenzidine （DAB）溶于PBS，用前过滤 ...

流式细胞分析术检测细胞凋亡的基本原理 流式细胞分析术在现代细胞分子生物学研究中起着越来越重要的作用。由于流式细胞分析是通过对单个细胞性状的快速测定，并结合先进的计算机分析系统，使得在短时间内可对大量细胞进行定性、定量测定。新一代流式细胞分析仪尚具有同时对单个细胞进行多参数测定的功能，可同时对细胞膜、细胞内蛋白质及核DNA进行标记后检测。 流式细胞分析术在细胞凋亡研究中具有特殊意义。 ...

亚“G1”峰检测法检测细胞凋亡 处于增殖周期中的细胞，根据其所处不同周期时相（Go/G1、S、G2/M），其DNA含量分布在2n～4n之间。发生凋亡的细胞由于核内DNA裂解成许多小片段，在酒精固定后，用细胞膜通透剂使小分子量的DNA片段穿过胞膜，使细胞原有的DNA部分丢失，仅剩下大片段DNA，这些细胞在DNA染色后，用流式细胞分析术检测其DNA含量，会出现一个DNA含量＜2n（即＜G1期细 ...