原位末端转移酶标记技术（ISEL）检测细胞凋亡

互联网2010-12-02

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原位末端转移酶标记技术（ISEL）检测细胞凋亡

根据细胞凋亡时核酸内切酶被激活，将细胞核染色体DNA从核小体连接处切断，产生单股或双股DNA链。根据这一生化特性，将外源性核苷酸和酶（末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和DNA聚合酶I或Klenow大片段）渗入到凋亡细胞中，催化标记的外源性核苷酸与断裂的 DNA链相结合，并通过一定的显示系统显色。

由于凋亡细胞内的内源性核酸酶被激活后，将自身染色体或DNA切割，产生与DNA断裂数目相同的3-OH末端。而TdT具有构型非特异性与3´-OH端部位的碱基结合的功能。因此，在末端脱氧核糖核酸转移酶或DNA多聚酶介导下，可使生物素化的dUTP标记至DNA断裂后形成的3´-OH末端，借生物素和亲和素的特异结合，使过氧化物酶连接至DNA断点，最后加入底物显色，可在荧光显微镜下观察，计数着色的凋亡细胞。