基于凋亡诱导蛋白酶变化的细胞凋亡检测
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基于凋亡诱导蛋白酶变化的细胞凋亡检测
半胱-天冬氨酸蛋白酶家族（cysteinyl aspartate specific protease，Caspase）是近几年人们发现的与ced-3同源的一类蛋白酶，具有10余种成员。“C”代表半胱氨酸在酶的活性中心，“aspase”代表其底物切割蛋白作用位点都在天冬氨酸羧基端，这是caspase家族最为独特的催化活性。Caspase一般以非活化的酶原形式广泛存在于大多数细胞中，研究认为，一些caspase家族成员可在凋亡中被活化，继而活化其他的caspase，产生放大级联反应并切割底物，从而介导凋亡的极早期发生过程。例如caspase家族成员之一caspase 3在某些特定效应分子（尤其是TNF和Fas）诱导的细胞凋亡中是必不可少的。
由于caspases家族可能是启动生化过程从而导致凋亡的最为重要的效应分子之一，因此对caspase活化的分析较其他常用的方法更能检测出凋亡的早期发生。Caspase可以切割多种重要底物， PARP是其中之一。PARP的裂解是细胞凋亡发生最有价值的标志，可以通过Western blot 来检测caspase对底物PARP的酶解。必须指出，Western blot方法虽具有说服力，但仍不能对caspase进行特异和定量的分析。原因在于大多数caspase的底物并不只由一种特异的caspase裂解，而是作用程度不同而已。以下介绍的酶联免疫吸附法可以高度特异地检测caspase 3的活性。
